Bortezomib增強(qiáng)EGCG、雷利度胺和三氧化二砷對(duì)骨髓瘤細(xì)胞凋亡作用機(jī)制的研究.pdf

1、多發(fā)性骨髓瘤是(multiple myeloma，MM)是一種起源于B細(xì)胞系的惡性腫瘤，其特征為產(chǎn)生單克隆免疫球蛋白的異常漿細(xì)胞增多，并在骨髓內(nèi)惡性增殖，引起骨折和骨髓功能衰竭，產(chǎn)生臨床癥狀。如果不進(jìn)行治療，進(jìn)展期MM患者的中位生存期僅為6個(gè)月。接受傳統(tǒng)化療，中位生存期也不超過3年，僅有25％的患者可以生存5年以上。因此MM目前仍是一種不可治愈的疾病。近幾年來，隨著對(duì)MM發(fā)病機(jī)理的深入研究，人們研制出一些新的靶向治療藥物，如：蛋白酶體抑

2、制劑(proteasome inhibitor)、免疫調(diào)節(jié)劑(immunemodulator)等新藥，療效明顯增加，但是疾病復(fù)發(fā)及耐藥仍是影響療效的重要因素。為了尋求新的治療藥物及方法，提高單藥或聯(lián)合用藥對(duì)MM的治療效果。我們分別對(duì)EGCG((-)epigallocatechin-3-gallate，又稱表沒食子兒茶素沒食子酸酯，是綠茶兒茶素的主要成分)、雷利度胺(Lenalidomide)、三氧化二砷(Arseruc Trioxide

3、，ATO，As2O3)三種藥物及分別聯(lián)合硼替佐米(Bortezomib，Velcade，PS341)對(duì)多發(fā)性骨髓瘤KM3細(xì)胞的促凋亡機(jī)制進(jìn)行了研究。目的是觀察這三種藥物及與硼替佐米聯(lián)合有無增強(qiáng)誘導(dǎo)MM細(xì)胞凋亡的作用，并初步探討其機(jī)制，為以后臨床聯(lián)合用藥增強(qiáng)Bortezomib的作用、克服耐藥性提供理論基礎(chǔ)。
　　 主要研究方法和結(jié)果：
　　 1.應(yīng)用臺(tái)盼藍(lán)拒染法檢測(cè)EGCG及聯(lián)合硼替佐米對(duì)KM3細(xì)胞生長(zhǎng)抑制的影響。應(yīng)用流

4、式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡。應(yīng)用SYBR Green Realtime-PCR方法檢測(cè)P65基因的表達(dá)情況。應(yīng)用Western Blotting技術(shù)檢測(cè)P65蛋白、磷酸化P65蛋白(pP65)、PARP、及caspase3-，8-，9蛋白的表達(dá)變化。結(jié)果顯示EGCG可以抑制KM3細(xì)胞生長(zhǎng)，抑制P65基因及其蛋白的表達(dá)，并通過激活caspase誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。當(dāng)與Bortezomib聯(lián)合時(shí)有協(xié)同作用。
　　 2.應(yīng)用臺(tái)盼藍(lán)拒染法檢測(cè)雷利度

5、胺及聯(lián)合硼替佐米對(duì)KM3細(xì)胞生長(zhǎng)抑制的影響。應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡。應(yīng)用RT-PCR(reverse transcription-polymerasechain reaction)方法檢測(cè)P65基因的表達(dá)情況。應(yīng)用Western Blotting檢測(cè)P65，pP65，PARP，caspase3-，8-，9蛋白的表達(dá)變化。結(jié)果顯示雷利度胺可以抑制KM3細(xì)胞生長(zhǎng)，抑制P65基因及其蛋白的表達(dá)并激活caspase-8誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。當(dāng)與Bo

6、rtezomib聯(lián)合時(shí)有協(xié)同作用。
　　 3.應(yīng)用臺(tái)盼藍(lán)拒染法檢測(cè)三氧化二砷及聯(lián)合硼替佐米對(duì)KM3細(xì)胞生長(zhǎng)抑制的影響。應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞的凋亡比例。應(yīng)用RT-PCR方法檢測(cè)P65基因的表達(dá)變化。應(yīng)用Western Blotting檢測(cè)P65，pP65，PARP.caspase-3，-8，-9蛋白的表達(dá)變化。結(jié)果顯示三氧化二砷可以抑制KM3細(xì)胞生長(zhǎng)、對(duì)P65基因及其蛋白沒有顯著影響，主要是通過激活caspase-3，-8，-9

7、，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。當(dāng)與Bortezomib聯(lián)合時(shí)有協(xié)同作用。
　　 結(jié)論及研究意義：
　　 1.EGCG單獨(dú)作用于KM3細(xì)胞可以抑制其生長(zhǎng)并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，與Bortezomib聯(lián)合時(shí)有協(xié)同效應(yīng)。
　　 2.雷利度胺單獨(dú)作用于KM3細(xì)胞可以抑制其生長(zhǎng)并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，與Bortezomib聯(lián)合時(shí)有協(xié)同效應(yīng)。
　　 3.三氧化二砷單獨(dú)作用于KM3細(xì)胞可以抑制其生長(zhǎng)并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，與Bortezomib聯(lián)合時(shí)有協(xié)同