tuc.475在b細胞淋巴瘤中的作用機制研究

1、T —U C ．4 7 5 在B 細胞淋巴瘤中的作用機制研究R o l e o f T —O C ．4 7 5i nB —L y m p h o m a c e l l江蘇省高校自然科學研究重大項目研究生：顧欣導師：郁多男教授2 揚州大學碩：b 學位論文結果：q R T —P C R 結果顯示，p 5 3 與O G T 可能的結合部位相比較未結合的顯示高表達，而T - u c ．4 7 5 卻沒有變化。p 5 3 激活1 ．5 h 以后

2、，O G T 啟動子序列表達增高，u c ．4 7 5 表達無差異；p 5 3 未激活，O G T 、T ．u c ．4 7 5 啟動子序列表達均無差異。結論：p 5 3 可與O G T 啟動子序列直接結合，與T ．u c ．4 7 5 啟動子無結合位點。p 5 3 激活后，可與O G T 啟動子序列結合，與T - l l C ．4 7 5 啟動子無結合位點；p 5 3未激活時，和O G T 、T —u c 。4 7 5 均無法結合。由

3、此可以得出O G T 受p 5 3 的直接調控，又因T ．u c ．4 7 5 位于O G T 基因中，因此p 5 3 可通過O G T 來調控T —U C ．4 7 5 的表達。第二部分研究T - u e ．4 7 5 在B 淋巴瘤細胞中的功能目的：根據(jù)長鏈非編碼R N A ：T ．U C ．4 7 5 在B 淋巴瘤細胞中的表達情況‘，通過過表達或敲低T ．U C ．4 7 5 的方法，體內體外實驗相結合，來進一步探究T ．u e ．

4、4 7 5的生物學功能?！椒ǎ哼\用實時熒光定量P C R ( q R T ．P C R ) 技術檢測長鏈非編碼R N AT ．u c ．4 7 5 和O G T 在不同B 淋巴瘤細胞和石蠟切片組織中的表達情況；構建和克隆U C ．4 7 5 ．M S C V ．P I G 質粒，通過短發(fā)夾R N A ( s h o r th a i r p i nR N A ，s h R N A ) 技術構造s h l n c - u c ．4 7

5、5 ．s h R N A 質粒，測序，擴增質粒；將質粒轉染到2 9 3 T 細胞中，運用q R T - P C R 技術檢測T ．U C ．4 7 5 有無過表達，檢測s h l n c ．u c ．4 7 5 ．s h R N A 有無低表達；人工制造U C ．4 7 5 - M s C v - P I G 逆轉錄病毒，人工制造s h l n c , - u c ．4 7 5 ．s h R N A逆轉錄病毒；感染B 淋巴瘤細胞3 8

6、8 9 ，使用倒置顯微鏡查看熒光，用流式細胞儀檢測感染效率，用嘌呤霉素篩選后使得感染效率約為1 0 0 ％；體外用流式細胞儀檢測周期，凋亡，細胞計數(shù)：體內將感染3 8 8 9 的淋巴瘤細胞皮下接種到B A L B ／e小鼠，一周后取出腫瘤做免疫組化和W B 實驗。結果：運用實時熒光定量P C R ( q R T ．P C R ) 技術檢測出長鏈非編碼R N AT ．U C ．4 7 5 和O G T 在不同B 淋巴瘤細胞和石蠟切片組織彌

7、漫性大B 中均高表達?？寺 ．1 ．1 1 3 ．4 7 5 和s h t n c —U C ．4 7 5 一s h R N A 后，測序比對1 0 0 ％；轉染2 9 3 T 細胞后，q R T ．P C R 技術檢測T ．u c ．4 7 5 相對于空載體對照表達增高，s h l n e - u c ．4 7 5 ．s h R N A相對于空載體對照表達降低；感染B 淋巴瘤細胞3 8 8 9 后，有綠色熒光且流式細胞儀檢測感染效率