CCL5-RANTES在糖尿病合并彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤作用機(jī)制的初步研究.pdf

1、趨化因子RANTES/CCL5是一類可誘導(dǎo)的、分泌型的小分子量炎癥性細(xì)胞因子,具有趨化和活化T細(xì)胞和單核細(xì)胞的功能。其中包含有68個(gè)氨基酸殘基,分子量為8kd的蛋白質(zhì),主要來自于NK細(xì)胞及T淋巴細(xì)胞,其對(duì)組織的損傷、感染和腫瘤的免疫起到重要的作用。
　　目的:
　　本實(shí)驗(yàn)探討趨化因子CCL5在糖尿病合并彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤(diffuse large B-cell Lymphoma,DLBCL)中的作用機(jī)制,從分子、細(xì)胞及動(dòng)物

2、水平探討CCL5基因的作用及其部分的分子機(jī)理,旨在為CCL5在糖尿病合并DLBCL作用機(jī)制提供有參考意義的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。
　　方法:
　　體外培養(yǎng)人正常B細(xì)胞和DLBCL細(xì)胞,RT-PCR分別檢測(cè)其CCL5mRNA表達(dá);通過5mmol/L、30mmol/L兩種糖濃度體外培養(yǎng)人彌漫大 B淋巴瘤細(xì)胞株和鼠源性彌漫大 B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞株 A20,RT-PCR分別檢測(cè)其CCL5mRNA表達(dá); BALB/ c小鼠腹腔注射小劑量鏈脲佐菌素(

3、STZ)構(gòu)建糖尿病鼠模型,通過慢病毒轉(zhuǎn)染技術(shù)建立穩(wěn)定的低表達(dá)CCL5和高表達(dá)CCL5細(xì)胞株。將低表達(dá)CCL5、高表達(dá)CCL5和未經(jīng)過轉(zhuǎn)染的三種細(xì)胞株皮下注入糖尿病 BALB/c小鼠和正常血糖 BALB/c小鼠體內(nèi),分別觀察成瘤率、成瘤時(shí)間、腫塊大小和質(zhì)地;瘤組織常規(guī) HE染色切片,免疫組化測(cè)各組CCL5的表達(dá);提取各組 BALB/c小鼠外周血,ELISA方法檢測(cè)外周血CCL5表達(dá)。
　　結(jié)果:
　　1、體外培養(yǎng)人DLBCL細(xì)

4、胞株 Ly1、Ly8、Ly10,其 CCL5mRNA表達(dá)高于均正常 B細(xì)胞(P<0.05)。
　　2、含Glu30mmol/L培養(yǎng)人DLBCL細(xì)胞株 Ly1、Ly8、Ly10和鼠 DLBCL細(xì)胞株 A20,培養(yǎng)2W后其CCL5mRNA均高于Glu5mmol/L培養(yǎng)(P<0.05)。
　　3、通過向糖尿病小鼠體內(nèi)注射低表達(dá) CCL5、高表達(dá) CCL5、未經(jīng)轉(zhuǎn)染的細(xì)胞株 A20,糖尿病小鼠成瘤率分別為 A1:93.3％;A2:6

5、0%;A3:66.6%,成瘤時(shí)間為 A1:7.0±0.85d; A2:9.5±2.8d;A3:9.0±1.8d。高于正常血糖鼠成瘤率 B1:20%;B2:20%;B3:6.6%,成瘤時(shí)間為 B1:12±1.3d;B2:14±2.5d;B3:12±4.2d。
　　4、免疫組化檢測(cè)糖尿病小鼠成瘤組織 CCL5表達(dá)高于正常血糖小鼠瘤組織。
　　5、ELISA測(cè)糖尿病鼠外周血CCL5表達(dá)量高于正常血糖鼠。
　　結(jié)論:
　

6、　1、人DLBCL細(xì)胞株CCL5mRNA表達(dá)高于正常 B細(xì)胞;
　　2、高糖培養(yǎng)人DLBCL細(xì)胞株和鼠DLBCL細(xì)胞株中CCL5mRNA高于低糖培養(yǎng),這表明高糖環(huán)境下DLBCL腫瘤細(xì)胞能夠產(chǎn)生更多的CCL5;
　　3、高表達(dá) CCL5比低表達(dá) CCL5的 DLBCL細(xì)胞株更容易在體內(nèi)成瘤,腫瘤生長(zhǎng)更快;在相同條件下糖尿病鼠比正常小鼠更容易成瘤;
　　4、糖尿病小鼠成瘤組織中CCL5的表達(dá)高于正常小鼠的成瘤組織;