FOXP3在彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤中的表達(dá)及預(yù)后研究.pdf

1、目的
　　 本研究旨在探索彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤(diffuselargeBcelllymphomaDLBCL)腫瘤組織（瘤內(nèi)和瘤周）中FOXP3蛋白的表達(dá)情況，分析其在不同病理亞型中的表達(dá)差異，并探討腫瘤細(xì)胞內(nèi)及瘤周FOXP3陽性細(xì)胞的預(yù)后意義。
　　 方法
　　 回顧性分析經(jīng)天津市腫瘤醫(yī)院確診的164例DLBCL患者的完整資料。分析其性別、年齡、ECOG評分、AnnArbor分期、IPI評分、骨髓是否累及、B癥狀

2、有無、結(jié)外受累數(shù)目、血乳酸脫氫酶(LDH)數(shù)值、治療模式、病理亞型（生發(fā)中心來源GCB與非生發(fā)中心來源non-GCB）等臨床資料。以CD20作為DLBCL腫瘤細(xì)胞的標(biāo)記，以FOXP3作為FOXP3+Tregs的細(xì)胞標(biāo)記，采用免疫組化及免疫熒光雙染色方法檢測腫瘤細(xì)胞內(nèi)和瘤周組織中FOXP3蛋白的表達(dá)，分析CD20和FOXP3蛋白的表達(dá)與DLBCL臨床病理特征及病理亞型的關(guān)系，以及其對患者預(yù)后的影響。采用實時定量PCR、WesternBlo

3、t方法檢測不同病理亞型的DLBCL細(xì)胞系中FOXP3的表達(dá)情況。
　　 結(jié)果
　　 1、通過免疫組化，我們發(fā)現(xiàn)FOXP3、CD20蛋白在DLBCL組織中呈不同程度的陽性表達(dá)。DLBCL組織癌巢中FOXP3多呈彌漫、散在分布，未見明顯的密集趨勢。癌旁組織中FOXP3+Treg細(xì)胞呈少量散在分布，無淋巴樣聚集。DLBCL癌巢中CD20呈明顯的密集趨勢;癌旁組織中CD20陽性細(xì)胞呈稀疏散在分布，并且呈淋巴樣聚集。
　　

4、 2、免疫熒光雙染色中，CD20抗體標(biāo)記DLBCL腫瘤細(xì)胞膜呈綠色熒光;FOXP3抗體標(biāo)記FOXP3+陽性細(xì)胞核呈紅色熒光。同時被綠色熒光和紅色熒光標(biāo)記的細(xì)胞為FOXP3陽性的DLBCL細(xì)胞，僅被紅色標(biāo)記細(xì)胞核的細(xì)胞為腫瘤間質(zhì)中散在的FOXP3+Treg細(xì)胞。FOXP3蛋白在DLBCL瘤內(nèi)與癌旁組織中表達(dá)率之間的差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(x2=3.29，P=0.02)。FOXP3蛋白在GCB、non-GCB亞型瘤內(nèi)的表達(dá)之間的差異具統(tǒng)計學(xué)意義

5、(P＜0.05)。
　　 3、腫瘤內(nèi)(CD20+組織)高密度FOXP3+表達(dá)與多種不良的臨床病理學(xué)特征之間關(guān)系密切，包括與DLBCL分期較晚(P=0.031)、結(jié)外受累(P=0.046)、IPI(3-4分)(P=0.050)non-GCB分型(P=0.021)有關(guān)。而瘤內(nèi)(CD20+組織)高FOXP3+表達(dá)與患者的性別、年齡、LDH水平、以及骨髓受累無關(guān)(P＞0.05)。相反的是，瘤周(CD20-組織)中FOXP3+Treg細(xì)胞

6、與彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤較好的臨床病理特征顯著相關(guān)性，如正常的LDH(P=0.039)、較少的結(jié)外受累(P=0.041)、IPI（0-2分）(P=0.024)，GCB分型(P=0.048)。
　　 4、FOXP3蛋白的表達(dá)與DLBCL患者OS及PFS的關(guān)系:
　　 年齡（P=0.023）、結(jié)外受累(P=0.032)和IPI評分(P=0.047)、GCB與non-GCB亞型等(P=0.041)指標(biāo)與總生存時間(OS)呈顯著負(fù)相

7、關(guān)。用單因素生存分析瘤內(nèi)和瘤周CD20+和FOXP3+細(xì)胞與OS之間的關(guān)系可見:GCB組和non-GCB組瘤內(nèi)FOXP3+細(xì)胞數(shù)目與OS均呈顯著負(fù)相關(guān)(P＜0.05）;然而值得注意的是，GCB組和non-GCB組瘤周FOXP3+細(xì)胞的數(shù)目與OS卻呈顯著正相關(guān)（P＜0.05）。
　　 用單因素生存分析患者的結(jié)外受累(P=0.033)和分期(P=0.041)、病理亞型(P=0.045)與PFS呈顯著正相關(guān)。對于FOXP3陽性細(xì)胞的預(yù)

8、后意義，用單因素生存分析瘤內(nèi)及瘤周FOXP3+細(xì)胞與PFS之間的關(guān)系均無顯著相關(guān)性(P＞0.05)。
　　 5、多因素預(yù)后分析:GCB與non-GCB亞型(P=0.046)、瘤內(nèi)FOXP3蛋白的表達(dá)情況(P=0.029)是影響DLBCL患者OS的獨(dú)立因素。
　　 6、通過RT-PCR證實DLBCL細(xì)胞系LY-3、LY-7細(xì)胞中存在不同程度FOXP3的轉(zhuǎn)錄。經(jīng)免疫印跡實驗，我們發(fā)現(xiàn)DLBCL細(xì)胞系LY-3、LY-7細(xì)胞中存

9、在不同程度FOXP3蛋白的表達(dá)。其中LY-3與LY-7之間FOXP3的表達(dá)差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　 結(jié)論
　　 FOXP3在彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤組織中的預(yù)后意義取決于FOXP3的分布及密度。瘤內(nèi)FOXP3+的腫瘤細(xì)胞數(shù)量是彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤總生存的獨(dú)立預(yù)測指標(biāo)，并且與DLBCL中GCB與non-GCB分型及其預(yù)后相關(guān)，為臨床提供分層的、更加個體化的預(yù)后預(yù)測和治療方案，尤其是對于預(yù)后較差的non-GCB型彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤