MLL2在B細(xì)胞淋巴瘤中的表達(dá)及調(diào)控機(jī)制研究.pdf

1、目的:討論混合譜系白血病2(MLL2)基因在B細(xì)胞淋巴瘤中的表達(dá)趨勢(shì)及其在淋巴瘤發(fā)生、發(fā)展中的作用。
　　方法:隨機(jī)收集2008年至今年我院所收治并經(jīng)病理證實(shí)的B細(xì)胞淋巴瘤患者病理切片33例，其中惰性淋巴瘤——濾泡細(xì)胞淋巴瘤(FL)18例、侵襲性淋巴瘤——彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤(DLBCL)15例;收集反應(yīng)性增生淋巴結(jié)（RHL）4例作為對(duì)照。應(yīng)用MLL2抗體行免疫組織化學(xué)染色，觀察MLL2蛋白在三組不同病理切片中表達(dá)的強(qiáng)弱趨勢(shì)及位置差

2、別，并利用免疫反應(yīng)積分(IRS)法評(píng)價(jià)免疫組化結(jié)果，從而進(jìn)一步量化三組間MLL2蛋白的表達(dá)狀況。利用Western blot技術(shù)檢測(cè)MLL2在彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞株(DOHH-2)中的表達(dá)，以人胚腎細(xì)胞株（HEK293）中MLL2的表達(dá)作為正常組織對(duì)照。采用RT-PCR方法檢測(cè)MLL2 mRNA在DOHH-2及HEK293細(xì)胞株中的表達(dá)，比較惡性B細(xì)胞淋巴瘤與對(duì)照細(xì)胞株中MLL2的表達(dá)趨勢(shì)。運(yùn)用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染技術(shù)將MLL2 siRNA轉(zhuǎn)染

3、DOHH-2細(xì)胞株，抑制MLL2 mRNA的表達(dá)，RT-PCR方法檢測(cè)轉(zhuǎn)染前后VEGF mRNA、β-caenin mRNA的表達(dá)變化。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)MLL2 siRNA轉(zhuǎn)染后DOHH-2細(xì)胞的調(diào)亡、細(xì)胞周期變化。對(duì)所得資料采用SPSS16.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，判別標(biāo)準(zhǔn):P＜0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。進(jìn)而探討MLL2對(duì)B細(xì)胞淋巴瘤生長(zhǎng)的影響。
　　結(jié)果:1.免疫組化結(jié)果表明，B細(xì)胞淋巴瘤的病理切片中，本應(yīng)在細(xì)胞核內(nèi)表達(dá)的MLL2蛋白，

4、在細(xì)胞核外表達(dá)增多。2.隨著腫瘤惡性度的增加彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤中檢測(cè)到的MLL2蛋白量以及MLL2蛋白核外表達(dá)現(xiàn)象明顯多于濾泡淋巴瘤和反應(yīng)性增生淋巴結(jié)，且染色強(qiáng)度逐漸加深。3.所有病理切片中，血管內(nèi)皮細(xì)胞及平滑肌細(xì)胞均見染色。4.RT-PCR及western blot方法均可以在DOHH-2細(xì)胞株中檢測(cè)到MLL2的表達(dá)，且MLL2siRNA轉(zhuǎn)染后可檢測(cè)到MLL2 mRNA表達(dá)水平顯著下降。5.MLL2 siRNA轉(zhuǎn)染后，誘導(dǎo)淋巴瘤細(xì)胞凋