完整以及去上皮羊膜移植術后眼表組織重塑型的研究.pdf

1、二十世紀四十年代，Rotth和Sorsby首次將羊膜移植應用到眼表手術，證實了羊膜移植能夠治療眼表損傷，但由于缺乏對羊膜生理的深入認識，羊膜在眼科的應用沒有能夠普及。直到1995年，Kim和Tseng等再次將羊膜用于眼表化學傷的動物實驗研究，發(fā)現羊膜可以促進兔的眼表上皮細胞貼附、生長以及分化成終末細胞并維持該細胞形態(tài)，減少上皮細胞凋亡。隨后大量的研究開始深入探討羊膜的作用機制，發(fā)現羊膜還具有降低炎癥反應，減少瘢痕形成以及抑制新生血管等作

2、用。羊膜在眼科臨床的應用得以迅速推廣和普及。
　　 目前，羊膜在眼科的應用總體上有三類方法：第一類是將羊膜作為眼表面的一種敷料，貼附在受損的眼表面，以促進眼表面損傷的修復；第二類是將羊膜作為眼表組織修復的移植替代物，用于受損的結膜或角膜區(qū)域，修復組織缺損，并提供損傷區(qū)周邊結膜或角膜上皮生長的微環(huán)境及支持物；第三類是將羊膜作為角膜或結膜上皮細胞體外培養(yǎng)的載體，用于構建組織工程角膜或結膜上皮。
　　 在羊膜的保存及應用過程中

3、，羊膜組織可以根據需要進行一定處理，如脫水處理去除羊膜的上皮細胞或基質細胞的處理等。在上述第一、二類應用中，一般使用完整的冷凍保存的羊膜組織，或脫水后室溫保存的羊膜組織。在第三類應用中，有研究使用去上皮的羊膜(denuded amniotic membrane，dAM)，也有使用完整羊膜(intact amniotic membrane，iAM)。并有研究將dAM和iAM進行了對比，發(fā)現角膜緣組織塊在iAM上進行體外培養(yǎng)時，構建的組織工

4、程角膜上皮比在dAM上表現更好的基底膜形成和更低的角膜上皮分化狀態(tài)，但角膜上皮細胞在dAM上的遷移速度要比在iAM上快。到目前為止，還沒有研究探討這兩種形式的羊膜在體內應用時治療效果的差異。
　　 本研究應用新西蘭兔結膜缺損動物模型，觀察iAM及dAM兩種羊膜在眼表重建手術中應用后組織塑型的差異；并在臨床翼狀胬肉患者手術中分別進行這兩種羊膜移植以修復結膜缺損，觀察這兩種羊膜移植術后結膜上皮的愈合情況。
　　 目的：比較完

5、整羊膜及去上皮羊膜在兔以及人結膜缺損修復術后結膜上皮的愈合以及手術局部的組織再塑型。
　　 方法：選取18只成年雄性新西蘭白兔，麻醉后剪除角膜緣顳上方5mm×5mm大小的結膜組織，隨后移植等大的羊膜組織，右眼移植完整羊膜(iAM)，左眼移植去上皮羊膜(dAM)。術后裂隙燈觀察手術區(qū)域的炎癥反應，并通過熒光素鈉染色觀察兔結膜上皮愈合情況。術后不同時間點處死實驗兔，取術區(qū)組織，免疫熒光染色檢測人羊膜組織基底膜成分Ⅶ型膠原，上皮角蛋白

6、K19及K12，纖維母細胞標志物α-SMA的表達情況，以及巨噬細胞浸潤情況；行PAS染色觀察杯狀細胞分化情況。在此基礎上，我們選擇病變程度相近的翼狀胬肉患者18只眼，隨機分為兩組，在實施翼狀胬肉切除后，行iAM或dAM移植，術后觀察結膜上皮愈合情況。
　　 結果：兔羊膜移植術后的熒光染色結果顯示，dAM移植組角膜緣以及結膜上皮修復的速度均明顯快于iAM移植組。H&E染色顯示，術后4天dAM組的角膜緣及結膜新生上皮出現明顯復層化，

7、而iAM組仍以單層上皮細胞為主。組織切片的PAS染色結果顯示，術后4天兩組術區(qū)結膜均未見杯狀細胞，在第5天時dAM組術區(qū)新生上皮開始出現杯狀細胞，術后兩周時全術區(qū)均存在杯狀細胞，其數量和形態(tài)與正常結膜組織相似；而iAM組的術區(qū)新生上皮中的杯狀細胞在術后第3周才開始出現，數量明顯低于其自身非術區(qū)正常結膜組織。
　　 免疫熒光染色結果顯示，術后5天內，兩組植片中均見人羊膜組織基底膜vn型膠原陽性染色；術后2周時，dAM組術區(qū)組織中人

8、羊膜基底膜Ⅶ型膠原染色陰性，而iAM組仍見陽性染色，其形態(tài)呈波浪狀，位于上皮下的基質層內；術后3周仍有表達，但較2周時明顯減弱。巨噬細胞特異性抗體MAC387免疫熒光染色顯示，iAM組術后第5天時修復的上皮下基質中開始出現巨噬細胞浸潤，并在2至3周內逐漸增多；然而在dAM組，術后2周時修復的上皮下基質中才出現MAC387陽性染色細胞，其數量在2周及3周時間點均明顯少于iAM組。α-SMA免疫熒光染色結果示，術后第2周時，iAM組術區(qū)基質

9、開始出現α-SMA陽性細胞，術后3周時表達明顯增強，而dAM組術區(qū)的基質在整個觀測時間范圍內均未見α-SMA陽性表達。上皮細胞角蛋白K12和角蛋白K19的免疫熒光染色結果顯示兩組無明顯差異。
　　 翼狀胬肉切除聯合iAM或dAM移植術后，結膜熒光素染色結果顯示，行dAM移植者術區(qū)結膜上皮在7天內完全愈合，而行iAM移植者術后結膜上皮愈合需要10至14天，兩組具有顯著性差異(p＜0.05)。
　　 結論：相比較于完整羊膜，