部分國蘭品種（系）的SRAP遺傳多樣性研究.pdf

1、國蘭（Chinese Cymbidium）主要包括春蘭（Cymbidium goeringii）、蕙蘭（Cymbidium faberi）、建蘭（Cymbidium ensifolium）、墨蘭（Cymbidium sinense）、春劍（Cymbidium tortisepalum var. longibracteatum）、蓮瓣蘭（Cymbidium tortisepalum）、豆瓣蘭（Cymbidium serratum）等8種地

2、生蘭類型。國蘭種類多樣，品種繁多，近些年來種間雜交及種內(nèi)雜交又得到快速發(fā)展，這給國蘭品種的分類和遺傳多樣性研究帶來了很大的困難。一直以來，國蘭多以形態(tài)學(xué)性狀，尤其是花部形態(tài)性狀作為品種分類的依據(jù)。然而，形態(tài)學(xué)分類在國蘭品種分類中，特別是雜交品種分類中存在很大的局限性。本研究對63個國蘭品種（系）的形態(tài)調(diào)查，并采用SRAP分子標(biāo)記對其進行多態(tài)性分分析及UPGMA聚類分析，在分子水平上探討國蘭的遺傳多樣性以及試圖找出雜交品種的親本來源，以期

3、為國蘭的品種鑒定、分類，確定親本來源、品種保護以及指導(dǎo)雜交育種提供有價值的參考資料。
　　本研究取得的主要成果如下：
　?。?）本試驗比較了變色硅膠干燥和液氮速凍兩種方法保存的國蘭葉片提取的DNA質(zhì)量，結(jié)果表明由變色硅膠干燥的國蘭葉片所提取的DNA完整性較好，無明顯降解，質(zhì)量較高，在減少多糖類及其他代謝產(chǎn)物的產(chǎn)生等方面甚至優(yōu)于液氮速凍。因此變色硅膠保存法適用于國蘭野外或遠距離采樣時的保存方法。
　?。?）本試驗以國蘭雜

4、交品種（系）為材料，采用L16（45）正交試驗設(shè)計對Taq DNA聚合酶、Mg2+、dNTPs、模板及引物等5個重要影響因素進行優(yōu)化，確定國蘭雜交品種（系） SRAP-PCR反應(yīng)的最優(yōu)反應(yīng)體系為（25μL體系）：Taq DNA聚合酶：1U；Mg2+：1.8mM；dNTPs：0.08mM；模板DNA：100ng；引物：上下游各0.3mM；10×PCR Buffer：2.5μL。
　　此外，本試驗采用DNA混合池技術(shù)（DNA pool

5、ing）快速篩選SRAP引物，從180對SRAP引物組合中篩選出32對擴增產(chǎn)物豐富、多態(tài)性高的引物組合。與常規(guī)方法相比，該技術(shù)明顯縮短試驗周期、節(jié)約了模板用量，為快速高效篩選SRAP引物提供了新思路。
　?。?）本試驗使用篩選出來的32對SRAP引物組合，對63個國蘭品種（系）進行擴增，共擴增條帶（NTL）923條，平均每對引物組全合產(chǎn)生28.84條，在擴增的條帶中具有多態(tài)性條帶有（NPL）881條，多態(tài)性位點百分率（PPL）為9

6、5.45％，說明國蘭品種（系）在分子水平上具有很高的遺傳多樣性。
　?。?）本試驗研究的63個國蘭品種（系）的居群間Nei’s遺傳距離的變化范圍在0.0448-0.1541之間，遺傳相似度變幅為0.8572-0.9524。遺傳相似系數(shù)在0.6890左右處，63個國蘭品種（系）分為7類，除個別春蘭原生種外，基本能把各個種區(qū)分開，親本相同的雜交品種（系）也優(yōu)先聚于一類，同時也驗證了部分交雜的親本來源。
　?。?）遺傳變異的分析顯