東北地區(qū)胡桃楸遺傳多樣性SRAP研究.pdf

1、胡桃楸(Juglans mandshurica)又名核桃楸，與水曲柳(Fraxinus mandshurica)、黃菠蘿(Phellodendron amurense)被稱為我國東北珍貴的“三大硬闊樹種”，但由于開發(fā)歷史較早，胡桃楸的分布范圍和種群數(shù)量明顯減少，目前，在林區(qū)內(nèi)已經(jīng)難以見到大莖用材。為了深化胡桃楸種質(zhì)資源的研究，本研究以國內(nèi)胡桃楸主要分布區(qū)域的東北地區(qū)選取17個點，采集樣本160份野生種和10份日本引進種作為材料，摸索并改

2、進胡桃楸供試材料DNA的提取方法，在完成170個胡桃楸樣本DNA提取的基礎(chǔ)上，對隨機并均勻抽取每個省份的30份材料進行了SRAP分子標(biāo)記，在72對引物中篩選出的多態(tài)性較好的12對SRAP引物對其進行PCR擴增和標(biāo)記分析。結(jié)果表明： (1)本試驗首次將SRAP技術(shù)應(yīng)用于胡桃楸的研究中，建立起胡桃楸的SRAP-PCR的反應(yīng)體系，同時發(fā)現(xiàn)RNA對PCR擴增無影響；實驗中對影響擴增的5個主要因素進行了優(yōu)化，確定20μL的反應(yīng)體系中：模板

3、DNA 60ng，1×Buffer，Mg<'2+>2．5mmol/L，dNTPs 0.1mmol/L，Taq酶2.0U，引物0.3umol/L，最佳退火溫度為49℃； (2)篩選出來的12對引物對90個胡桃楸樣本擴增，共擴增出342條條帶，平均每對引物28．5條，其中多態(tài)性條帶312條，占總數(shù)的91.22％，其大小介于200～2500bp之間。 (3)胡桃楸17個居群有效等位基因數(shù)介于1.2048～1.2992之間，根據(jù)

4、有效等位基因數(shù)、Shannon多樣性指數(shù)和Nei基因多樣性指數(shù)所揭示的遺傳多樣性規(guī)律，認為佳木斯居群具有較高的遺傳多樣性，而佐家群遺傳多樣性則偏低。 (4)胡桃楸的變異主要存在于居群內(nèi)，占變異總數(shù)的72.95％，居群間的遺傳變異占27.05％(P<0.001)；遺傳距離與居群的地理距離之間存在顯著的相關(guān)性(r=0.6778，P<0.01)。 (5)胡桃楸17個居群間遺傳相似系數(shù)介于0.54～0.94．之間。在遺傳相似系數(shù)