懷地黃遺傳多樣性及品種鑒定的SRAP研究.pdf

1、本研究優(yōu)化了SRAP-PCR反應(yīng)條件，用SRAP標(biāo)記技術(shù)構(gòu)建了23個(gè)懷地黃品種的指紋圖譜，研究了23個(gè)懷地黃品種間的遺傳多樣性及品種鑒定，為地黃品種的鑒定、種質(zhì)資源保護(hù)、雜交育種的親本選配和開發(fā)利用提供理論和技術(shù)依據(jù)。本論文的主要研究內(nèi)容和結(jié)果如下： 1、建立了地黃的SRAP反應(yīng)體系和擴(kuò)增程序。PCR反應(yīng)體系：反應(yīng)總體積為25μL包括：1×buffer擴(kuò)增緩沖液，2.0 mmol/LMg2+，0.36μmol/L引物，0.30

2、mmol/LdNTPs，20 ng模板DNA和2.5 UTaqDNA聚合酶；擴(kuò)增程序?yàn)椋?4℃預(yù)變性3 min后，前5個(gè)循環(huán)為94℃變性1 min，35℃退火1 min，72℃延伸1 min，后35個(gè)循環(huán)將退火溫度提高到50℃，其它條件不變，最后72℃延伸7 min。 2、用SRAP分子標(biāo)記研究了懷地黃品種遺傳多樣性和親緣關(guān)系。從288對(duì)引物組合中篩選出13對(duì)能夠擴(kuò)增出清晰而穩(wěn)定條帶的引物，用于擴(kuò)增23個(gè)懷地黃品種基因組DNA，

3、共擴(kuò)增出338條譜帶，其中多態(tài)性條帶310條，平均多態(tài)性比率為91.71％，有效等位基因數(shù)為1.3229，雜合度為0.2008，Shannon多樣性指數(shù)為0.3217，遺傳相似系數(shù)在0.335-0.703之間，平均遺傳相似系數(shù)為0.518。根據(jù)23個(gè)品種的Jaccard相似系數(shù)，進(jìn)行聚類分析，繪制樹狀圖，將23個(gè)品種劃分為4個(gè)類群。三個(gè)北京系列和野生1號(hào)、9104、9302、串地龍、金狀元、85-5、武陟1號(hào)、農(nóng)家、小黑英聚為A類，野生

4、2號(hào)獨(dú)自聚為B類，武陟系列中除武陟1號(hào)外其余8個(gè)武陟品種和生津1號(hào)聚為C類，金皇后單獨(dú)聚為D類。主成分分析結(jié)果支持這一聚類結(jié)果。聚類圖可將本研究23個(gè)地黃品種分為兩個(gè)類群，外部形態(tài)特征相近的品種基本聚在一起。 3.利用23個(gè)懷地黃品種的SRAP指紋圖譜，獲得特異的DNA片段標(biāo)記，進(jìn)行了品種分子鑒定。7對(duì)引物組合共鑒定出14個(gè)地黃品種。其中em3/me17引物組合鑒定出金皇后(700bp)、9302(170.bp)、農(nóng)家(20.b

5、p)、野生2號(hào)(160.bp)、武陟5號(hào)(520bp、220 bp)、武陟9號(hào)(140.bp)，em8/me18引物組合鑒定出北京1號(hào)(530 bp)、武陟3號(hào)(490 bp)、武陟5號(hào)(590 bp)、武陟6號(hào)(520 bp)、武陟7號(hào)(40.bp)，em12/me18引物組合鑒定9104(270 bp)、北京2號(hào)(60.bp)、野生2號(hào)(265 bp、420 bp、590 bp)、武陟5號(hào)(490 bp)。豐富了地黃品種鑒定的方法。