菠蘿SRAP分子標(biāo)記體系的建立及其遺傳多樣性研究.pdf

1、菠蘿是我國(guó)南亞熱帶地區(qū)最具特色和優(yōu)勢(shì)的熱帶水果之一，但是菠蘿育種研究還比較落后，面臨著大量種質(zhì)資源的流失、鑒別與分類(lèi)雜亂且欠準(zhǔn)確、遺傳距離狹窄、品種退化等問(wèn)題，難以適應(yīng)菠蘿產(chǎn)業(yè)化發(fā)展的需要。如何利用現(xiàn)有的種質(zhì)資源和合理選擇利用自然變異的優(yōu)良株系，或者通過(guò)人工雜交和誘變的方法來(lái)創(chuàng)造新的優(yōu)良品種勢(shì)在必行。本研究對(duì)菠蘿田間生物學(xué)特性進(jìn)行簡(jiǎn)單描述，利用SRAP分子標(biāo)記技術(shù)及流式細(xì)胞儀對(duì)61份菠蘿種質(zhì)資源進(jìn)行種質(zhì)鑒定、分類(lèi)、親緣關(guān)系及菠蘿倍性鑒定

2、等方面研究，從形態(tài)學(xué)水平、分子水平以及細(xì)胞學(xué)水平上評(píng)價(jià)目前所收集保存的菠蘿資源的遺傳多樣性，為我國(guó)菠蘿的生產(chǎn)及育種提供理論依據(jù)。研究結(jié)果如下：[1]菠蘿屬于富含多糖、多酚的植物，且葉片革質(zhì)化和含多種次生物質(zhì)，這嚴(yán)重影響了DNA的抽提效率。本研究采用改良CTAB法提取到高質(zhì)量的DNA，適合SRAF分析。 [2]建立了菠蘿SRAP的反應(yīng)體系： 最佳的SRAP反應(yīng)體系組分為：總反應(yīng)體積為20μL，包括2.0μL10xPCRbu

3、ffer，1.2UTaqDNA聚合酶，20ng模板DNA，0.2mMdNTPs，0.3μM引物，2.5mMMg2+。 PCR擴(kuò)增程序?yàn)椋?4℃預(yù)變性5min；94℃變性1min，35℃復(fù)性1min，72℃延伸1min，5個(gè)循環(huán)；94℃變性1min，50℃復(fù)性1min，72℃延伸1min，35個(gè)循環(huán)；72℃延伸6min，4℃保存。 [3]從99對(duì)SRAP引物中篩選出35對(duì)引物對(duì)61份菠蘿種質(zhì)進(jìn)行遺傳多樣性分析，都得到了清晰

4、的指紋，并且所有品種表現(xiàn)出多態(tài)性，說(shuō)明了SRAP技術(shù)在菠蘿品種鑒定中的可行性。其中35對(duì)SRAP標(biāo)記獲得567條帶，多態(tài)性位點(diǎn)384個(gè)，多態(tài)條帶比率為67.72％。 [4]利用SRAP標(biāo)記得到的數(shù)據(jù)矩陣，采用Nei&Li的方法計(jì)算出各材料間的遺傳相似系數(shù)，應(yīng)用UPGMA法獲得聚類(lèi)圖。表明61份菠蘿種質(zhì)間的親緣關(guān)系較近，說(shuō)明所收集的種質(zhì)遺傳基礎(chǔ)較窄。在類(lèi)群的劃分上，依相似系數(shù)0.83的水平，可以將供試的61份菠蘿種質(zhì)分為5種類(lèi)型。