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文檔簡(jiǎn)介
1、本研究以中國(guó)部分地方黃牛早勝牛、安西牛、南陽牛、郟縣紅牛、棗北牛、恩施黃牛、黃陂黃牛、鄖巴牛、湘西牛、平陸山地牛、秦巴牛和三個(gè)引入品種西門塔爾牛、夏洛來牛、德國(guó)黃牛為研究對(duì)象,采用世界糧農(nóng)組織(FAO)和國(guó)際動(dòng)物遺傳學(xué)會(huì)(ISAG)聯(lián)合推薦的12對(duì)微衛(wèi)星DNA引物,以ABI3100-Avant全自動(dòng)基因序列分析儀為平臺(tái),結(jié)合熒光-多重PCR技術(shù),檢測(cè)11個(gè)地方黃牛和3個(gè)引入品種,共計(jì)826個(gè)個(gè)體的基因型,并對(duì)標(biāo)記后產(chǎn)物進(jìn)行序列分析。通過
2、計(jì)算遺傳雜合度、多態(tài)信息含量、有效等位基因數(shù)、奈氏遺傳距離和奈氏標(biāo)準(zhǔn)遺傳距離,采用鄰近結(jié)合法和非加權(quán)類平均法聚類等方法,分析中國(guó)地方黃牛群體內(nèi)和群體間的遺傳變異。結(jié)果如下: 本試驗(yàn)中14個(gè)中外黃牛品種在12個(gè)微衛(wèi)星位點(diǎn)上,除西門塔爾牛在ILSTS011位點(diǎn)上為低度多態(tài)(PIC=0.22)外,其余所有位點(diǎn)在14個(gè)品種中均表現(xiàn)為高度多態(tài)或中度多態(tài)。其中11個(gè)中國(guó)地方黃牛品種在所有位點(diǎn)均為高度多態(tài)或中度多態(tài),說明11個(gè)中國(guó)地方黃牛品種
3、遺傳多樣性較外來品種相對(duì)豐富,具有一定的選擇潛力,應(yīng)對(duì)它們給與保護(hù),在保種過程中要避免遺傳多樣性的丟失。另外14個(gè)中外黃牛品種在12個(gè)微衛(wèi)星位點(diǎn)上的平均雜合度最高為0.82,最低為0.50,其中11個(gè)中國(guó)地方黃牛品種在12個(gè)位點(diǎn)上明顯比3個(gè)引入品種的雜合度要高出很多,表明遺傳變異程度較高,但也反映了該品種的遺傳一致性最差,同時(shí)也表明中國(guó)地方黃牛品種在未來保種過程中還可以進(jìn)一步的純繁選育,以提高該品種的遺傳一致性;也進(jìn)一步說明在以后的種質(zhì)
4、資源的保存過程中,在保存遺傳多樣性的同時(shí),應(yīng)注意提高品種的純度。3個(gè)引入品種的平均雜合度較低,說明其遺傳變異最小,也反映了該品種的遺傳一致性最高。 在12個(gè)微衛(wèi)星座位中,共檢測(cè)出171個(gè)等位基因,其中ETH10,ETH152和ILSTS005擁有的等位基因數(shù)最少為10個(gè),ILSTS006擁有的等位基因數(shù)最多為20個(gè),其余座位的復(fù)等位基因數(shù)在12~18個(gè)之間,平均每個(gè)微衛(wèi)星位點(diǎn)為14.2個(gè)。其中郟縣紅牛的平均等位基因數(shù)最高,為9,
5、而平均等位基因數(shù)最低出現(xiàn)在西門塔爾牛和德國(guó)黃牛這兩個(gè)外來品種中,分別為5.8和5.1;在11個(gè)中國(guó)地方黃牛品種中安西牛的平均等位基因數(shù)較低,只有7,其他中國(guó)地方黃牛品種的平均等位基因數(shù)都在8個(gè)以上。14個(gè)黃牛品種在12個(gè)微衛(wèi)星位點(diǎn)上擁有的有效等位基因數(shù)(Ne)非常豐富,介于1.10~11.1之間。其中有6個(gè)微衛(wèi)星位點(diǎn)的平均有效等位基因數(shù)(Ne)數(shù)目超過4個(gè),可以認(rèn)為這些位點(diǎn)是最優(yōu)勢(shì)位點(diǎn).。ETH225位點(diǎn)擁有的平均有效等位基因數(shù)(Ne)
6、最多,平均達(dá)到6個(gè);而ILSTS005位點(diǎn)擁有的平均有效等位基因數(shù)(Ne)最少,平均僅達(dá)到2個(gè)。并且11個(gè)中國(guó)地方黃牛品種在12個(gè)位點(diǎn)上明顯比3個(gè)外來品種的有效等位基因數(shù)多。在11個(gè)中國(guó)地方黃牛品種中,一共發(fā)現(xiàn)有21個(gè)特有等位基因,每個(gè)品種都至少在某一微衛(wèi)星位點(diǎn)上有一個(gè)特有等位基因,其中恩施黃牛擁有的特有等位基因數(shù)最多,達(dá)到4個(gè);隕巴牛和湘西牛各有3個(gè);黃陂黃牛、秦巴牛和安西牛各有2個(gè)。另外,11個(gè)中國(guó)地方黃牛品種的所擁有的特有等位基因
7、頻率都較低,除了平陸山地牛在ETH10這個(gè)位點(diǎn)上的204bp等位基因的頻率達(dá)到0.048,秦巴牛在HEL9這個(gè)位點(diǎn)上的135bp等位基因頻率在0.042之外,其余的都低于0.040。14個(gè)中外黃牛品種在12個(gè)微衛(wèi)星座位中一共發(fā)現(xiàn)14個(gè)優(yōu)勢(shì)等位基因,等位基因頻率都大于0.50,有一定規(guī)律性。CSSM66座位的180bp和182bp等位基因,HAUT24座位的122bp等位基因,ILSTS011座位的258bp、260bp、266bp和26
8、8bp等位基因,INRA063座位的174bp等位基因,ETH3座位的113bp等位基因,ETH10座位的214bp等位基因,ETH152的191bp和195bp等位基因,INRA035的101bp等位基因,ILSTS005座位的182bp等位基因,在大部分的牛品種中的基因頻率都很高。12個(gè)微衛(wèi)星座位在14個(gè)黃牛群品種上發(fā)現(xiàn)的共有等位基因一共有30個(gè),說明這30個(gè)基因是14個(gè)中外黃牛品種中最為原始古老、保守的等位基因,其中共有等位基因最
9、多的是HAUT24和ETH3位點(diǎn),為4個(gè);最少的是ILSTS011位點(diǎn),為1個(gè)。 根據(jù)聚類圖DA/UPGMA和DS/UPGMA,14個(gè)中外黃牛品種被聚為五大類。第一類:湖北省的恩施黃牛與湖北省的鄖巴牛先相聚,湖北省的棗北牛與河南省的南陽牛先相聚,然后二者再與湖南省的湘西牛聚為一類;第二類:陜西省的秦巴牛先與湖北省的黃陂黃牛先相聚后,再與河南省的郟縣紅牛聚為一類;第三類:甘肅省的早勝牛與山西省的平陸山地牛聚為一類;第四類:甘肅省的
10、安西牛自成一類;第五類:德國(guó)黃牛與西門塔爾牛相聚后,再與夏洛來牛聚為一類。根據(jù)聚類圖DA/NJ和DS/NJ,湖北省的恩施黃牛與湖北省的鄖巴牛優(yōu)先相聚,湖南省的湘西牛與湖北省的棗北牛優(yōu)先相聚,然后再與河南省的南陽黃牛相聚;陜西省的秦巴牛和湖北省的黃陂黃牛先相聚,接著再依次和河南省的郟縣紅牛、甘肅省的早勝牛、山西省的平陸山地牛、甘肅省的安西牛相聚,最后與三個(gè)引入品種相聚。聚類結(jié)果與地方黃牛品種的原產(chǎn)地相關(guān),但是與《中國(guó)牛品種志》(1988)
11、把湖北省的恩施黃牛和湖南省的湘西牛合稱為巫陵牛;陜西省的秦巴牛和湖北省的隕巴牛合稱為巴山牛稍有差異。從聚類分析、地理分布、群體結(jié)構(gòu)分析表明,還需要作進(jìn)一步的探討。 根據(jù)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù),提出對(duì)現(xiàn)有中國(guó)地方黃牛品種的保種措施:研究提高冷精解凍后人工輸精和胚胎移植的成功效率,盡快解決體外保種的障礙;在活體保種中,要采取保種場(chǎng)和保種區(qū)相結(jié)合的保種措施。 多重PCR技術(shù)有著單對(duì)引物PCR無可比擬的優(yōu)越性,它一次反應(yīng)可以同時(shí)檢測(cè)多對(duì)引物的
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