中國(guó)部分地區(qū)冠耳霉的遺傳多樣性研究.pdf

1、用RAPD和ISSR分子標(biāo)記，對(duì)來(lái)自安徽省祁門(mén)縣牯牛降自然保護(hù)區(qū)、安徽省金寨縣天堂寨自然保護(hù)區(qū)、安徽省滁州市瑯琊山森林公園、安徽省宣城市敬亭山森林公園、安徽省潛山縣、安徽省霍山縣、安徽省合肥市大蜀山森林公園、安徽省合肥市紫蓬山森林公園、山東省青州市仰天山自然保護(hù)區(qū)、山東省煙臺(tái)市昆崳山自然保護(hù)區(qū)、貴州省遵義市鳳凰山森林公園、山西省安澤縣和陜西省旬邑縣的13個(gè)不同地理來(lái)源居群的131株冠耳霉菌株Conidiobolus coronatus進(jìn)

2、行了遺傳多樣性分析。
　　 建立了冠耳霉ISSR反應(yīng)體系和RAPD反應(yīng)體系，ISSR-PCR反應(yīng)體系經(jīng)優(yōu)化確定為20μL的PCR反應(yīng)液內(nèi)含：2 mmol/L MgC12、0.2 mmol/L dNTPs、0.5μmol/L引物、10ng模板、2μl10×buffer和0.5U Taq酶。PCR擴(kuò)增程序：94℃預(yù)變性2min；接著進(jìn)行35個(gè)循環(huán)：94℃變性1min，48.51℃復(fù)性1.5min，72℃延伸2min；循環(huán)結(jié)束后72℃

3、延伸8min。RAPD-PCR反應(yīng)體系經(jīng)優(yōu)化確定為20μL的PCR反應(yīng)液內(nèi)含：2.5mmol/LMgCl2、0.1mmol/L dNTPs、1μmol/L引物、10ng模板、21μL10×buffer和0.5U Taq酶。PCR擴(kuò)增程序：94℃預(yù)變性3min；接著進(jìn)行40個(gè)循環(huán)：94℃變性1min，35℃復(fù)性1min，72℃延伸1min；循環(huán)結(jié)束后72℃延伸5min。
　　 4個(gè)RAPD引物共擴(kuò)增到81個(gè)位點(diǎn)，其中81個(gè)是多態(tài)性

4、位點(diǎn)，多態(tài)性比率為100％。131株冠耳霉Nei’s基因多樣性指數(shù)(H)為0.234±0.161，Shannon信息多樣性指數(shù)(I)為0.372±0.210。9個(gè)居群多態(tài)位點(diǎn)百分率范圍、Nei’s基因多樣性指數(shù)范圍和Shannon信息多樣性指數(shù)范圍分別為61.9％～100％、0.181±0.195～0.342±0.154和0.280±0.271～0.504±0.210。居群間產(chǎn)生了較大的遺傳分化(Gst=0.451)，分析表明，居群間變

5、異占45.1％，居群內(nèi)變異占54.9％。基于RAPD數(shù)據(jù)計(jì)算冠耳霉菌株的遺傳相似系數(shù)(GS)結(jié)果，131份材料之間的GS值在0.54～0.99之間，平均為0.80，由供試材料RAPD分子標(biāo)記數(shù)據(jù)的相似系數(shù)聚類(lèi)分析所繪出的樹(shù)狀聚類(lèi)圖，當(dāng)GS取值為0.76時(shí)，可將絕大多數(shù)供試材料分為4大類(lèi)群。
　　 3個(gè)ISSR引物共擴(kuò)增到了50個(gè)位點(diǎn)，其中48個(gè)是多態(tài)性位點(diǎn)，多態(tài)性比率為96％。131株冠耳霉Nei’s基因多樣性指數(shù)(H)為0.1

6、92±0.162，Shannon信息多樣性指數(shù)(I)為0.314±0.218。9個(gè)居群多態(tài)位點(diǎn)百分率范圍、Nei’s基因多樣性指數(shù)范圍和Shannon信息多樣性指數(shù)范圍分別為51.8％～88.4％、0.115±0.167～0.229±0.139和0.180±0.248～0.367±0.201。居群間產(chǎn)生了較大的遺傳分化(Gst=0.381)，分析表明，居群間變異占38.1％，居群內(nèi)變異占61.9％?；贗SSR數(shù)據(jù)計(jì)算冠耳霉菌株的遺傳相

7、似系數(shù)(GS)結(jié)果，131份材料之間的GS值在0.52～0.99之間，平均為0.86，由供試材料ISSR分子標(biāo)記數(shù)據(jù)的相似系數(shù)聚類(lèi)分析所繪出的樹(shù)狀聚類(lèi)，當(dāng)GS取值為0.81時(shí)，可將絕大多數(shù)供試材料分為4大類(lèi)群。
　　 基于RAPD和ISSR綜合數(shù)據(jù)計(jì)算冠耳霉的遺傳相似系數(shù)(GS)結(jié)果，131株冠耳霉菌株之間的GS值在0.59～0.99之間，平均為0.81，處于RAPD和ISSR之間，但差別不大。由供試材料的RAPD和ISSR兩種

8、實(shí)驗(yàn)方法的數(shù)據(jù)綜合后的相似系數(shù)聚類(lèi)分析所繪出的樹(shù)狀聚類(lèi)圖，當(dāng)GS取值為0.74時(shí)，可將絕大多數(shù)供試材料分為4大類(lèi)群：第一類(lèi)為安徽牯牛降和安徽霍山縣；第二大類(lèi)為安徽瑯琊山、安徽天堂寨、安徽敬亭山、安徽潛山、安徽大蜀山、安徽紫蓬山、山西安澤縣、山東仰天山的小部分和山東昆崳山的小部分；第三大類(lèi)全部為貴州鳳凰山；第四大類(lèi)為山東仰天山的大部分和山東昆崳山的大部分。這與RAPD和ISSR分析的結(jié)果較為相似，但比較而言，與RAPD分析的結(jié)果更為相近。