牛筋草ISSR反應(yīng)體系優(yōu)化與我國部分地區(qū)牛筋草遺傳多樣性分析.pdf

1、牛筋草(Eleusineindica(L.)Gaerth)為一年生禾本科穆屬(Eleusine)植物，是我國農(nóng)田重要的惡性雜草，具有頑強(qiáng)的生命力和繁殖力。本文應(yīng)用微衛(wèi)星方法對(duì)我國北京、河南、安徽、山東、浙江和廣東六省市的18個(gè)牛筋草居群進(jìn)行遺傳多樣性分析，對(duì)牛筋草適應(yīng)能力以及分布發(fā)展?jié)摿M(jìn)行初探。本研究結(jié)果如下：
　　 一、利用L16(45)正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)和單因素優(yōu)化試驗(yàn)兩種方法，獲得牛筋草ISSR-PCR的最適反應(yīng)體系為：模板D

2、NA80ng，Mg2+1.75mmol/L，dNTP0.4mmol/L，引物0.3μmol/L，TaqDNA聚合酶1U，10×PCRBuffer2.5μL，最后用ddH2O補(bǔ)足至25μL。ISSR-PCR的擴(kuò)增程序?yàn)椋?4℃預(yù)變性5min；94℃變性30s，退火30s，72℃延伸1min，35循環(huán)；72℃延伸10min。
　　 二、利用從30對(duì)引物中篩選出的14對(duì)多態(tài)性高、重復(fù)性好的ISSR引物，在18個(gè)居群中，擴(kuò)增得到158條

3、帶，DNA片段大小分布在150～2000bp之間，其中多態(tài)性條帶146，多態(tài)性百分率為92.41％，每條引物擴(kuò)增位點(diǎn)數(shù)為5～17條不等，平均每對(duì)引物擴(kuò)增14.6個(gè)位點(diǎn)。
　　 三、利用NTSYSpc2.10e生物軟件對(duì)18個(gè)供試牛筋草居群進(jìn)行分析。Jaccard遺傳相似系數(shù)(GS)數(shù)分布在0.3125～0.8750之間，遺傳相似度最大為0.8750,分別為HS和ST，即來自河南商丘和山東泰安兩地的牛筋草居群，顯示出兩地牛筋草基因