云南省部分地區(qū)木霉屬真菌多樣性及ITS序列分析.pdf

1、木霉屬（Trichoderma spp.）真菌，屬于半知菌亞門，絲孢綱、絲孢目，絲孢科，木霉除個別種可導(dǎo)致蘑菇生產(chǎn)污染，造成減產(chǎn)外，大多數(shù)成員在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)上有獨(dú)特的生防慨木霉菌對人類的生產(chǎn)、生活和科學(xué)研究十分重要。云南省因其地理位置特殊，生物多樣性豐富，但對于云南省木霉菌菌種多樣性和系統(tǒng)發(fā)育研究少見于報道。因此，對于云南省木霉菌菌種的鑒定十分必要。本研究對采自云南省昆明、普洱、大理、麗江、保山和昭通6個地區(qū)的腐木和腐殖土壤的木霉進(jìn)行分離，

2、純化，并對分離獲得的112株木霉，采用形態(tài)學(xué)分類的方法結(jié)合ITS序列分析，對其進(jìn)行分類研究；采取最大簡約法（MP）和貝葉斯法構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹，探討木霉菌菌種之間系統(tǒng)發(fā)育的關(guān)系。為木霉菌的物種多樣性研究及分子系統(tǒng)學(xué)研究提供依據(jù)。研究結(jié)果如下：
　　 （1）木霉的形態(tài)學(xué)鑒定。對分離的112株木霉菌，根據(jù)形態(tài)學(xué)特征和培養(yǎng)性狀，有105株木霉菌鑒定到種，鑒定出9種木霉菌，有7株木霉未鑒定到種。鑒定種分別為深綠木霉T.atroviride，

3、哈茨木霉T.harzianum，康氏木霉T.koningii，長枝木霉T.longibrachiatum，里氏木霉T.reesei，鉤狀木霉T.hamatum，裝絮木霉T.tomentosum，變綠木霉T.viridescens和蓋姆斯木霉T.gamsii。其中裝絮木霉T.tomentosum和蓋姆斯木霉T.gamsii為中國新紀(jì)錄種。變綠木霉T.viridescens為中國大陸新發(fā)現(xiàn)中，里氏木霉T.reesei為首次在云南省發(fā)現(xiàn)的木霉

4、種。
　　 （2）ITS序列測定結(jié)果。112株菌的ITS序列（包含ITS1，5.8S，ITS2）長度為518bp-554bp，共48個單倍型。遺傳距離結(jié)果顯示，各組內(nèi)木霉的遺傳距離差異較小，其中Longibrachiatum組內(nèi)差異最小。Pachybasium組和Trichoderma組間差異不大。Longibrachiatum組則與其他兩組組間差異較大。
　　 （3）根據(jù)ITS區(qū)域序列構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)育樹，將菌株分A，B，

5、C3個群：A群主要是Longibrachiatum組的T.reesei和T.longibrachiatum，又可分為兩個分支Al（T.reesei），A2（T.longibrachiatum），兩個分支中都包含了它們的模式菌株。B群為Pachybasium組下的木霉，由4個分支組成，其中Bl包含了哈茨木霉（SWFC8700，SWFC8710，SWFC8718，SWFC8726，SWFC8731，SWFC8927，SWFC8929，SWF

6、C8952，SWFC10236，SWFC10321和SWFC10322）和哈茨木霉Th1群的參考菌株以及裝絮木霉（T.tomentosum）SWFC8667。B2中主要是哈茨木霉（SWFC8664，SWFC8672，SWFC8693，SWFC8945，SWFC8947和SWFC8954）和哈茨木霉的模式菌株。B3為哈茨木霉SWFC10216，Th2群和Th4群哈茨木霉的參考菌株以及裝絮木霉的模式菌株。B4分支則是未鑒定到種的SWFC91

7、09和卷曲木霉的模式菌株。本次研究中SWFC8667與裝絮木霉的模式菌株ITS序列有一定的差異。C群為木霉屬下的Trichoderma組，由5個分支組成，C1主要是本次鑒定的深綠木霉及其模式菌株以及Th3型的哈茨木霉。C2為康氏木霉（SWFC8665，SWFC8674，SWFC8675，SWFC10317，SWFC10319和SWFC8685）及其的模式菌株、蓋姆斯木霉和兩株參考蓋姆斯木霉菌株以及未鑒定到種的SWFC10319。C3則是

8、由康氏木霉SWFC8676、變綠木霉及其模式菌株組成。C4由未鑒定到種的木霉SWFC10164，SWFC10210和SWFC10235組成。C5為鉤狀木霉分支，包含了鑒定的鉤狀木霉及其模式菌株。
　　 （4）通過ITS序列建立系統(tǒng)發(fā)育樹，劃分出了三個不同的組。其中Longibrachiatum組在發(fā)育進(jìn)化中，與其他兩組關(guān)系比較遠(yuǎn)。Trichoderma組和Pachybasium組在進(jìn)化分支中，處于同一個進(jìn)化群中，關(guān)系比較近。Lo