甲基對硫磷對金魚(Carassius auratus)的抗雄-類雌激素效應(yīng)研究.pdf

1、甲基對硫磷(O,O-dimethyl O-4-nitrophenyl phosphorothioate, methyl parathion)是一種有機(jī)磷農(nóng)藥,能夠引起大鼠睪丸、前列腺、附睪、貯精囊等器官重量降低,硬骨魚類精子數(shù)量減少、畸形率上升等一系列生殖損傷,而生殖系統(tǒng)功能的維持與生殖細(xì)胞的發(fā)生都和內(nèi)分泌系統(tǒng)密切相關(guān)。因此,本文以性成熟金魚為研究對象,利用多個(gè)指標(biāo)評價(jià)了甲基對硫磷暴露對金魚的抗雄/類雌激素效應(yīng)以及誘導(dǎo)的生殖損傷。其中,

2、以性腺指數(shù)(gonadosomatic index, GSI)和性腺組織學(xué)觀察分析甲基對硫磷對金魚的生殖損傷;以雄激素睪酮(testosterone, T)、雌激素17β-雌二醇(estradiol, E2)分泌、血漿卵黃原蛋白(vitellogenin, Vtg)生成、以及雄激素受體(androgen receptor, AR)、雌激素受體(estrogen receptors, ERs)和芳香化酶(cytochrome P450 a

3、romatase, CYP19/P450arom) mRNA等探討甲基對硫磷誘導(dǎo)生殖毒性的抗雄/雌激素效應(yīng)。
　　(1)0.001、0.01、0.1 mg/L甲基對硫磷對雄性金魚暴露21d后,采用放射免疫分析法(radioimmunoassay, RIA)測定血漿E2、T含量,同時(shí)采用實(shí)時(shí)定量PCR方法檢測了肝臟Vtg mRNA、性腺P450arom A mRNA、肝臟和性腺AR基因表達(dá)水平。結(jié)果表明:甲基對硫磷對肝臟Vtg mR

4、NA的表達(dá)影響不顯著,也沒有誘導(dǎo)血漿Vtg的生成,但0.01、0.1 mg/L甲基對硫磷誘導(dǎo)血漿E2、T含量,性腺P450arom A,肝臟、性腺AR表達(dá)水平顯著下降,說明甲基對硫磷對雄魚表現(xiàn)出抗雄激素效應(yīng)。
　　(2)0.001、0.01、0.1 mg/L甲基對硫磷暴露雌性金魚21d,采用RIA檢測了血漿E2含量,同時(shí)采用實(shí)時(shí)定量PCR方法檢測了肝臟和性腺中ERs(ERα和ERβ)表達(dá)水平。所得結(jié)果與雄魚存在差異:雌魚血漿E2含

5、量顯著上升,0.001、0.01 mg/L處理組性腺ERβ及肝臟ERα、ERβ的表達(dá)水平顯著上調(diào),說明甲基對硫磷可能對雌性金魚表現(xiàn)出類雌激素效應(yīng)。
　　(3)0.001、0.01、0.1 mg/L甲基對硫磷暴露雄魚21d,導(dǎo)致雄魚GSI顯著下降;精巢組織切片觀察發(fā)現(xiàn)0.01、0.10 mg/L甲基對硫磷導(dǎo)致精原細(xì)胞、Leydig氏細(xì)胞出現(xiàn)輕微腫脹,小葉間質(zhì)擴(kuò)大,基膜溶解、精子數(shù)量明顯減少,個(gè)別精小葉內(nèi)出現(xiàn)了生精細(xì)胞團(tuán)的混亂。本研究

6、認(rèn)為雄魚血漿T含量、性腺AR表達(dá)水平的顯著下降是導(dǎo)致以上生殖損傷的直接原因。
　　(4)甲基對硫磷暴露雌魚21d導(dǎo)致GSI極顯著上升,本研究認(rèn)為甲基對硫磷發(fā)揮類雌激素效應(yīng)誘導(dǎo)雌魚血漿E2含量上升,最終導(dǎo)致卵巢異常增重,GSI上升。
　　綜上所述,本文從組織/器官水平、蛋白水平、分子水平等方面探究了甲基對硫磷對雄/雌性金魚的抗雄/類雌激素效應(yīng)以及所誘導(dǎo)的生殖毒性,發(fā)現(xiàn)甲基對硫磷對雄/雌性金魚產(chǎn)生了不同的內(nèi)分泌干擾效應(yīng):(1)甲