金魚（Carassius auratus）雌核發(fā)育單倍體和二倍體胚胎蛋白質(zhì)組比較研究.pdf

1、在具有相同基因組的金魚雌核發(fā)育單倍體和二倍體胚胎發(fā)育過程中,單倍體本身的條件導(dǎo)致了它在基因表達(dá)上有缺陷,發(fā)育不正常,而二倍體發(fā)育正常.為了研究在金魚雌核發(fā)育單倍體和二倍體胚胎發(fā)育過程中的蛋白質(zhì)表達(dá)水平的差異,并鑒定一些與發(fā)育相關(guān)的重要蛋白質(zhì),我們以遺傳背景一致的金魚雌核發(fā)育單倍體和正常二倍體的相應(yīng)眼睛形成的發(fā)育階段的胚胎為材料(3個(gè)時(shí)期,分別為HE-1和DE-1,HE-2和DE-2,HE-3和DE-3),然后提取胚胎的全蛋白,用二維聚丙

2、烯酰胺凝膠電泳的方法進(jìn)行蛋白質(zhì)點(diǎn)的分離,獲得了質(zhì)量較好的凝膠圖譜,結(jié)果顯示大部分蛋白質(zhì)點(diǎn)分布在pH5-10,相對(duì)分子質(zhì)量在10000-50000Da.利用PDQUEST 2-D分析軟件對(duì)掃描后的凝膠圖象進(jìn)行了處理,經(jīng)斑點(diǎn)檢測,匹配和量化,獲得了一系列的差異蛋白質(zhì)點(diǎn)圖譜,發(fā)現(xiàn)在HE-3和DE-3間有100多個(gè)有顯著性差異的蛋白質(zhì)點(diǎn),HE-2和DE-2間有250多個(gè)有顯著性差異蛋白質(zhì)點(diǎn).分別選取其中70個(gè)分辨好的差異蛋白質(zhì)點(diǎn)進(jìn)行原位胰蛋白酶

3、酶解,酶解的肽片段用基質(zhì)輔助激光解析電離分行時(shí)間質(zhì)譜(MALDI-TOF MS)得到肽質(zhì)指紋圖譜,再在網(wǎng)上PeptIdent軟件中搜索SWIS S-PROT和TrEMBL數(shù)據(jù)庫,初步鑒定了HE-3和DE-3上32個(gè)差異蛋白質(zhì)點(diǎn),其中包括16個(gè)表達(dá)量上有差異的蛋白質(zhì)點(diǎn)(P<0.05)和16個(gè)有無表達(dá)的差異蛋白質(zhì)點(diǎn),并且初步鑒定了HE-2和DE-2上25個(gè)差異蛋白質(zhì)點(diǎn),其中包括5個(gè)表達(dá)量上有差異的蛋白質(zhì)點(diǎn)(P<0.05)和20個(gè)有無表達(dá)的差