真菌流行病學(xué)調(diào)查及白念珠菌和熱帶念珠菌基因分型研究.pdf

1、實(shí)驗?zāi)康? 調(diào)查北京協(xié)和醫(yī)院1999～2005年臨床分離真菌的種屬分類和分布，并研究北京協(xié)和醫(yī)院ICU病房及同一患者不同標(biāo)本來源或不同時間收集的菌株的基因分型，并以唐山市人民醫(yī)院腫瘤科病房患者分離的菌株作為參照，探討菌株的區(qū)域流行情況。 實(shí)驗方法: 錄入北京協(xié)和醫(yī)院1999～2005年臨床分離鑒定的真菌，進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計、分析。收集北京協(xié)和醫(yī)院2004和2005年臨床分離鑒定的白念珠菌和熱帶念珠菌，采用底物顯色鑒定法

2、和API 20C鑒定試劑盒重新鑒定，再采用隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性DNA(random amplified polymorphic DNA，RAPD)和重復(fù)序列PCR(repetitive-sequence-based PCR，Rep-PCR)進(jìn)行分型研究；并對2005年同一患者不同標(biāo)本來源或不同時間收集的菌株通過RAPD和Rep-PCR方法進(jìn)行基因分型研究。收集唐山市人民醫(yī)院2005年腫瘤科病房患者臨床分離的白念珠菌和熱帶念珠菌，采用RAPD方

3、法進(jìn)行同源性分析。 結(jié)果: 北京協(xié)和醫(yī)院1999～2005年臨床分離的真菌構(gòu)成情況和變化趨勢： 從1999～2005年臨床送檢真菌標(biāo)本明顯升高，標(biāo)本量從1727份升高到8533份，菌株檢測陽性數(shù)從554升高到2848株，陽性菌株數(shù)占送檢標(biāo)本比例為25.3％～41.5％之間。菌株陽性病例數(shù)從1999年的324升高到2005年的2010例，陽性率在17.3％～28.5％之間。 白念珠菌檢測數(shù)量從1999年的1

4、77例升高到2005年的736例，熱帶念珠菌從53例升高到171例，光滑念珠菌從45例升高到188例，煙曲霉從5例升高到144例，黃曲霉從0升高到85例。白念珠菌比例為35％～55％，光滑念珠菌比例為6.7％～14.5％，熱帶念珠菌為8.3％～16.4％，克柔念珠菌為1.2％～4.1％，近平滑念珠菌為0.3％～1.6％。煙曲霉比例由1999年的1.5％升高到2005年的7.2％，黃曲霉比例由1999年的0％升高到2005年的4.2％?？?/p>

5、柔念珠菌2002檢出量為36株，在這幾年中所占比例最高為4.1％。2003年所檢菌株總體數(shù)量及各種屬數(shù)量降低，考慮SARS影響，醫(yī)院患者減少或患者結(jié)構(gòu)改變所致。不同標(biāo)本來源分離的菌株分布不同：血液標(biāo)本分離的所有菌株白念珠菌占最多，依次為熱帶念珠菌、近平滑念珠菌、光滑念珠菌和新型隱球菌等；肺泡灌洗液標(biāo)本分離的白念珠菌最多，其次青霉、煙曲霉、光滑念珠菌：尿液、生殖道標(biāo)本分離的白念珠菌最多，其次為光滑念珠菌和熱帶念珠菌；腦脊液標(biāo)本分離的新型隱

6、球菌最多，其次白念珠菌和熱帶念珠菌；呼吸道標(biāo)本分離的白念珠菌最多，其次為熱帶念珠菌和光滑念珠菌。 1999～2005年血液標(biāo)本送檢分布顯示，標(biāo)本量從1999年的4884個臨床檢測標(biāo)本上升到2005年的11287個臨床檢測標(biāo)本。所有菌株的陽性分離株從1999年的358株上升到2005年的1265株，陽性率從1999年(7.3％)到2002年(11.6％)呈上升趨勢，2001年到2005年保持平穩(wěn)趨勢(10.1％～13.8％)，20

7、03年受SARS影響陽性率有所降低(比例為10.1％)。血中鑒定的真菌陽性標(biāo)本數(shù)從1999年的11例上升到2005年的106例。陽性率從1999年到2002年呈上升趨勢(從3.1％上升到10.1％)，2003年和2004年有所下降，2005年又開始回升。陽性患者例數(shù)從1999年的8例上升到2005年的47例。 1999～2005年血培養(yǎng)陽性菌株總計226例，其中可查到病例的菌株為53株，其中包括女性24株，男性29株。平均年齡5

8、2.4歲(除外一例新生兒敗血癥患者)。外科住院患者19例，ICU和MICU住院經(jīng)歷20例，血液科標(biāo)本2例，腫瘤患者21例。手術(shù)治療患者41例，中心靜脈插管28例，插管引流患者35例。 檢測到罕見部位真菌陽性菌株如眼部分離出新型隱球菌等，關(guān)節(jié)沖洗液分離出尖端賽多孢等。 隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性DNA和Rep-PCR方法對白念珠菌和熱帶念珠菌進(jìn)行同源性分析結(jié)果如下： 2004年北京協(xié)和醫(yī)院ICU病房分離的8株白念珠菌采用RAP

9、D方法分析顯示存在5種基因型，Rep-PCR方法有3種基因型。2005年北京協(xié)和醫(yī)院ICU病房白念珠菌采用RAPD方法基因分型共有4種基因型(B型包括B1和B2亞型)，Rep-PCR方法有5種基因型(A型包括A1和A2亞型，C型包括C1和C2亞型)。同一患者不同標(biāo)本來源或不同時間采集白念珠菌標(biāo)本進(jìn)行基因型分析，共分析六名患者，其中三名患者基因型自身完全一致，三名患者基因型自身不完全一致。本次試驗在2004年和2005年分別檢測到ICU病

10、房內(nèi)兩種基因型的熱帶念珠菌，其中有一種基因型在2004年和2005年均有分布。同一患者不同標(biāo)本來源或不同時間采集標(biāo)本熱帶念珠菌基因型一致，說明患者可能感染反復(fù)發(fā)作而不是重復(fù)感染或院內(nèi)存在單一菌株基因型流行為主。 2005年唐山市人民醫(yī)院腫瘤患者體內(nèi)分離的36株白念珠菌經(jīng)RAPD方法檢測顯示共有2種基因型(其中A型包括3個亞型，B型包括2個亞型)。唐山市人民醫(yī)院分離的8株熱帶念珠菌共顯示六種基因型，其中一種基因型分離于化療一病區(qū)，

11、另外五種基因型分離于化療二病區(qū)和胸外科病區(qū)。 結(jié)論: 北京協(xié)和醫(yī)院1999～2005年臨床分離的真菌仍以白念珠菌所占比例最大，其次熱帶念珠菌和光滑念珠菌，近年來曲霉菌所占比例有所增高，臨床真菌送檢量及陽性檢出率都明顯升高。 不同標(biāo)本來源分離的菌株分布不同：血液標(biāo)本中所占比例最多的分別是白念珠菌、熱帶念珠菌和近平滑念珠菌；腦脊液標(biāo)本中新生隱球菌所占比例最多，其次白念珠菌和熱帶念珠菌；肺泡灌洗液中白念珠菌最多，其次青

12、霉、煙曲霉、光滑念珠菌；尿液、生殖道分離的菌株白念珠菌最多，其次為光滑念珠菌和熱帶念珠菌；呼吸道分離的白念珠菌最多，其次為熱帶念珠菌和光滑念珠菌。 血源念珠菌感染與手術(shù)治療，中心靜脈插管等有一定的相關(guān)性。 北京協(xié)和醫(yī)院ICU病房在2004和2005年存在白念珠菌和熱帶念珠菌的克隆流行；同一患者不同標(biāo)本來源或不同時間采集標(biāo)本白念珠菌無明顯克隆流行性，熱帶念珠菌有明顯的克隆流行性。唐山市人民醫(yī)院分離的白念珠菌存在明顯的克隆流