白念珠菌多位點序列分型研究.pdf

1、目的:應用多位點序列分型(MultilocusSequenceTyping，MLST)對臨床分離白念珠菌進行分型研究，同時與ABC(ATP-bindingcassette)分型、隨機擴增多態(tài)DNA技術(randomLyamplifiedpolymorphicDNA，RAPD)結果比較，研究菌株分型與標本來源、藥物敏感性等之間的關系，建立國內白念珠菌MLST數(shù)據庫。
　　方法:
　　1.收集臨床分離白念珠菌，進行體外藥物敏感性

2、測定，選取10株氟康唑耐藥株，23株氟康唑敏感株，提取菌株DNA。
　　2.建立MLST分型方法，選擇7對管家基因進行PCR擴增，并將目的基因產物測序，然后將測序結果與標準序列比對后上傳至MLST網站數(shù)據庫，獲得相應的由7對管家基因組成的等位基因譜，最后將等位基因譜再次提交網站確認序列型(Sequencetypes，STs)。
　　3.選取ABC分型和RAPD特定引物進行PCR擴增，產物經瓊脂糖凝膠電泳后確定分型。
　

3、　4.將MLST結果經MEGA4.0生物信息學分析軟件分析后，采用非加權分組算術均方根法(UPGMA)制作最小生成樹，進一步分析ST與菌株信息、其他分型方法的關系。
　　結果:
　　1.33株臨床白念珠菌通過MLST產生了33個STs，采用ABC方法分類為3型，采用RAPD方法引物RSD-12產生13型，引物OPE-18產生11型。
　　2.最小生成樹選取區(qū)分值0.0025作為分界線劃定組，產生8個組，顯示白念珠菌的M