白念珠菌CaRCH1基因的功能研究.pdf

1、白念珠菌RCH1基因的ORF.長(zhǎng)為1236 bp,編碼一個(gè)411個(gè)氨基酸的蛋白,由于該基因的缺失株對(duì)氟康唑有抗性表型,所以曾經(jīng)命名為CaFSP1。在課題研究中,我們發(fā)現(xiàn)rch1△／rch1△缺失株和pmc1△／pmc1△缺失株具有類似的表型,都對(duì)鈣離子敏感,對(duì)LiCl和氟康唑有抗性的表型。我們知道環(huán)孢霉素A(CsA)可以抑制鈣調(diào)磷酸酶,阻斷白念珠菌Ca2+／鈣調(diào)磷酸酶途徑。于是,首先我們將CsA加入CaCl2的固體培養(yǎng)基中,rch1△／

2、rch1△缺失株可以回復(fù)到野生型的生長(zhǎng)狀態(tài)。第二,胞外低濃度的Mg2+能夠抑制pmc1△／pmc1△缺失株對(duì)鈣離子的敏感表型,我們將Md2+加入CaCl2培養(yǎng)基中,rch1△／rch1△缺失株對(duì)CaCl2敏感的表型消失。第三,我們構(gòu)建了pmc1△／pmc1△ rch1△／rchl△雙基因缺失株,發(fā)現(xiàn)該缺失株與pmc1△／pmc1△缺失株相比,對(duì)鈣離子更加敏感,而對(duì)LiCl和氟康唑的表型沒(méi)有明顯的差異。此外,鈣調(diào)磷酸酶影響白念珠菌菌落的形

3、態(tài)和菌絲的形成,我們發(fā)現(xiàn)pmc1△／pmc1△ rch1△／rch1△雙基因缺失株在血清誘導(dǎo)下,菌絲的形成受到抑制。然而,在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中,我們發(fā)現(xiàn)白念珠菌僅缺失PMC1基因,就會(huì)大大減弱細(xì)胞的毒力。最后,我們又構(gòu)建了pCK-RCH1質(zhì)粒,該質(zhì)粒可以過(guò)量表達(dá)RCH1基因,將其轉(zhuǎn)入pmc1△／pmc1△缺失株中,但未能彌補(bǔ)pmc1△／pmc1△缺失株的表型。以上實(shí)驗(yàn)可以說(shuō)明CaRch1p具有調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)鈣離子穩(wěn)態(tài)的作用,因此我們將該基因重新命名