白念珠菌HOG基因致病相關(guān)性研究.pdf

1、目的：比較白念珠菌HOG21(hog/hog雙等位基因缺失株)、CHK21(chk/chk雙等位基因缺失株)和標(biāo)準(zhǔn)株CAF-2菌株細(xì)胞壁超微結(jié)構(gòu)、對氟康唑MIC值及在系統(tǒng)性感染小鼠模型中致病力的差異，探討HOG基因在白念珠菌致病機(jī)制中的作用及其與CHK基因的關(guān)系，旨在尋找系統(tǒng)性白念珠菌感染致病相關(guān)基因，篩選新的抗真菌藥物作用靶點，為今后研發(fā)出更高效、低毒、廣譜的新型抗真菌藥物提供理論依據(jù)。
　　 方法：
　　 1.建立系

2、統(tǒng)性白念珠菌感染小鼠模型，比較死亡率并描繪生存曲線；平皿稀釋法檢測各組脾腎組織菌落形成單位(CFU)數(shù)目；制作腎組織病理學(xué)標(biāo)本，評估真菌感染程度。
　　 2.利用掃描和透射電鏡觀察三株菌株細(xì)胞壁超微結(jié)構(gòu)的差異。
　　 3.微量稀釋法檢測三株菌株對氟康唑MIC值的差異。
　　 結(jié)果：
　　 1.體內(nèi)實驗：
　　 (1)成功建立系統(tǒng)性白念珠菌感染小鼠模型。
　　 (2)CAF-2組、CHK21

3、組和HOG21組感染小鼠觀察期間死亡率分別為100％、0、0，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　 (3)脾腎組織菌落形成單位(CFU)結(jié)果：各觀察時間點CAF-2組脾腎組織帶菌量(CFU)比HOG21組和CHK21組高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義；HOG21組與CHK21組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義。
　　 (4)組織病理學(xué)觀察結(jié)果：CAF-2組腎髓質(zhì)區(qū)見彌漫性菌絲和孢子，伴人多形核粒細(xì)胞(PMN)為主的炎性細(xì)胞浸潤，腎組織結(jié)構(gòu)破壞嚴(yán)重；HOG2

4、1組腎乳頭見少量菌絲和孢子被PMN包裹形成局限性膿腫；CHK21組則表現(xiàn)為以腎臟髓腔內(nèi)PMN浸潤為主。電鏡結(jié)果：CAF-2組腎小管上皮細(xì)胞微絨毛破壞嚴(yán)重；HOG21組腎小管上皮細(xì)胞內(nèi)見被吞噬的孢子；而CHK21組腎組織病變較輕。
　　 2.體外實驗：
　　 (1)掃描電鏡下，CAF-2表面光滑；CHK21表面見小斑塊樣突起；HOG21表面見細(xì)小點狀突起。透射電鏡下，CAF-2胞壁結(jié)構(gòu)完整，電子致密層、電子透明層及細(xì)胞膜各

5、層結(jié)構(gòu)清晰可見；CHK21細(xì)胞壁可見電子致密層變薄甚至局灶性缺失；HOG21細(xì)胞壁電子透明層厚薄不一，部分見電子致密層局灶性缺失、細(xì)胞膜外突、不連續(xù)以及胞膜周圍囊泡聚集的現(xiàn)象。
　　 (2)微量稀釋法檢測各組酵母細(xì)胞對氟康唑MIC值：CAF-2:1ug/ml；CHK21:0.125～0.25ug/ml；HOG21:0.25ug/ml。
　　 結(jié)論：
　　 1.HOG基因參與白念珠菌致病性的調(diào)控過程。