腫瘤微酸環(huán)境敏感的基因遞送系統(tǒng)的構建和初步評價.pdf

1、國際抗癌聯(lián)盟發(fā)布的數(shù)據(jù)表明，全球癌癥發(fā)病形式嚴峻，發(fā)病率與死亡率呈持續(xù)上升趨勢，中國的癌癥發(fā)病率幾乎占了全球的一半，目前我國癌癥發(fā)病率為285/10萬，平均每天每分鐘有6人被診斷為惡性腫瘤。在我國，乳腺癌已成為女性最常見的惡性腫瘤之一，目前已步入每年2％～3％的快速增長期。目前的抗腫瘤藥物靶向性差、毒副作用大、治療效果不佳等缺點。
　　脂質體是一種類似于生物膜結構的雙分子層微囊，由于其具有細胞類似結構，進入人體后主要被網狀內皮系統(tǒng)

2、吞噬，使藥物靶向聚集在肝、脾、肺等組織中。但脂質體作為藥物載體仍存在對疾病的靶向性差，穩(wěn)定性欠佳等缺點。pH敏感脂質體在低pH值時脂質體由有穩(wěn)定結構變?yōu)椴环€(wěn)定結構。使得pH敏感脂質體內吞進細胞后質膜破裂或與其他質膜的融合，這使藥物在未達到溶酶體前釋放，避免的了溶酶體的降解，更有效的將藥物傳遞到細胞中。由于腫瘤間質液的pH值顯著低于周圍正常組織，所以研究pH敏感脂質體對腫瘤的治療作用有很大臨床價值。
　　目的:
　　由于腫瘤細

3、胞外呈微酸環(huán)境，設計了在低pH內可插入細胞膜的多肽pHLIP，通過合成DSPE-PEG-pHLIP。實現(xiàn)對入微酸環(huán)境下的腫瘤細胞膜的靶向定位。組氨酸八聚體帶正電，可協(xié)助小分子進入細胞，本研究中，將硬脂酸和組氨酸八聚體偶合，形成帶陽離子的聚合物，由靜電吸附作用與siRNA形成SA-H8/siRNA復合物，提高siRNA的載藥效率。
　　方法:
　　在文獻和預實驗的基礎上，初步確定了pH敏感型聚合物SA-H8的合成方法，在室溫條

4、件下，充氮氣避光攪拌32h，通過MS對其進行表征。
　　確定合成導向性脂材(DSPE-PEG-pHLIP)的合成方法，在室溫條件下，充氮氣避光攪拌48h，通過測定多肽中剩余巰基的含量確定反應終點，并對其進行MS表征。
　　在文獻基礎上，采用薄膜分散法制備脂質體，分別以香豆素和siRNA為模型藥物，以粒徑和包封率為考察指標，確定最佳處方工藝，以制劑的外觀、粒徑電位和形態(tài)作為指標，考察制得脂質體的穩(wěn)定性。
　　以人乳腺癌細

5、胞(MCF-7)為細胞模型，分別在pH6.5和pH7.4培養(yǎng)基的環(huán)境中，給予壓縮載藥脂質體和普通載藥脂質體，孵育后，將細胞用PBS處理后，用流式細胞儀對載體體外細胞攝取性質進行分析。
　　結果:
　　經MS分析，合成得到SA-H8和DSPE-PEG-pHLIP，冷凍干燥后成白色絮狀固體，產率分別為48.9％和52.2％;制備香豆素脂質體，所得脂質體粒徑較均一，得到微黃色發(fā)有乳光的均勻混懸液，并且較穩(wěn)定，測得該脂質體的包封率為

6、91.0％;制備siRNA的脂質體制劑在透射電子顯微鏡下均勻分布，粒子中間呈亮光狀。
　　流式細胞分析結果顯示，相比普通脂質體，pHLIP修飾載體的細胞攝取具備顯著的pH響應特性，pH6.8條件下攝取明顯高于pH7.4環(huán)境。
　　結論:
　　以香豆素和siRNA為模型藥物，以SA-H8陽離子聚合物為siRNA載體，用DSPE-PEG-pHLIP修飾脂質體表面，采用薄膜分散法制備脂質體，穩(wěn)定性良好。以人乳腺癌MCF-7為