腫瘤微酸環(huán)境敏感的基因遞送系統(tǒng)的構(gòu)建和初步評(píng)價(jià).pdf

1、國(guó)際抗癌聯(lián)盟發(fā)布的數(shù)據(jù)表明，全球癌癥發(fā)病形式嚴(yán)峻，發(fā)病率與死亡率呈持續(xù)上升趨勢(shì)，中國(guó)的癌癥發(fā)病率幾乎占了全球的一半，目前我國(guó)癌癥發(fā)病率為285/10萬，平均每天每分鐘有6人被診斷為惡性腫瘤。在我國(guó)，乳腺癌已成為女性最常見的惡性腫瘤之一，目前已步入每年2％～3％的快速增長(zhǎng)期。目前的抗腫瘤藥物靶向性差、毒副作用大、治療效果不佳等缺點(diǎn)。
　　脂質(zhì)體是一種類似于生物膜結(jié)構(gòu)的雙分子層微囊，由于其具有細(xì)胞類似結(jié)構(gòu)，進(jìn)入人體后主要被網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)

2、吞噬，使藥物靶向聚集在肝、脾、肺等組織中。但脂質(zhì)體作為藥物載體仍存在對(duì)疾病的靶向性差，穩(wěn)定性欠佳等缺點(diǎn)。pH敏感脂質(zhì)體在低pH值時(shí)脂質(zhì)體由有穩(wěn)定結(jié)構(gòu)變?yōu)椴环€(wěn)定結(jié)構(gòu)。使得pH敏感脂質(zhì)體內(nèi)吞進(jìn)細(xì)胞后質(zhì)膜破裂或與其他質(zhì)膜的融合，這使藥物在未達(dá)到溶酶體前釋放，避免的了溶酶體的降解，更有效的將藥物傳遞到細(xì)胞中。由于腫瘤間質(zhì)液的pH值顯著低于周圍正常組織，所以研究pH敏感脂質(zhì)體對(duì)腫瘤的治療作用有很大臨床價(jià)值。
　　目的:
　　由于腫瘤細(xì)

3、胞外呈微酸環(huán)境，設(shè)計(jì)了在低pH內(nèi)可插入細(xì)胞膜的多肽pHLIP，通過合成DSPE-PEG-pHLIP。實(shí)現(xiàn)對(duì)入微酸環(huán)境下的腫瘤細(xì)胞膜的靶向定位。組氨酸八聚體帶正電，可協(xié)助小分子進(jìn)入細(xì)胞，本研究中，將硬脂酸和組氨酸八聚體偶合，形成帶陽離子的聚合物，由靜電吸附作用與siRNA形成SA-H8/siRNA復(fù)合物，提高siRNA的載藥效率。
　　方法:
　　在文獻(xiàn)和預(yù)實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，初步確定了pH敏感型聚合物SA-H8的合成方法，在室溫條

4、件下，充氮?dú)獗芄鈹嚢?2h，通過MS對(duì)其進(jìn)行表征。
　　確定合成導(dǎo)向性脂材(DSPE-PEG-pHLIP)的合成方法，在室溫條件下，充氮?dú)獗芄鈹嚢?8h，通過測(cè)定多肽中剩余巰基的含量確定反應(yīng)終點(diǎn)，并對(duì)其進(jìn)行MS表征。
　　在文獻(xiàn)基礎(chǔ)上，采用薄膜分散法制備脂質(zhì)體，分別以香豆素和siRNA為模型藥物，以粒徑和包封率為考察指標(biāo)，確定最佳處方工藝，以制劑的外觀、粒徑電位和形態(tài)作為指標(biāo)，考察制得脂質(zhì)體的穩(wěn)定性。
　　以人乳腺癌細(xì)

5、胞(MCF-7)為細(xì)胞模型，分別在pH6.5和pH7.4培養(yǎng)基的環(huán)境中，給予壓縮載藥脂質(zhì)體和普通載藥脂質(zhì)體，孵育后，將細(xì)胞用PBS處理后，用流式細(xì)胞儀對(duì)載體體外細(xì)胞攝取性質(zhì)進(jìn)行分析。
　　結(jié)果:
　　經(jīng)MS分析，合成得到SA-H8和DSPE-PEG-pHLIP，冷凍干燥后成白色絮狀固體，產(chǎn)率分別為48.9％和52.2％;制備香豆素脂質(zhì)體，所得脂質(zhì)體粒徑較均一，得到微黃色發(fā)有乳光的均勻混懸液，并且較穩(wěn)定，測(cè)得該脂質(zhì)體的包封率為

6、91.0％;制備siRNA的脂質(zhì)體制劑在透射電子顯微鏡下均勻分布，粒子中間呈亮光狀。
　　流式細(xì)胞分析結(jié)果顯示，相比普通脂質(zhì)體，pHLIP修飾載體的細(xì)胞攝取具備顯著的pH響應(yīng)特性，pH6.8條件下攝取明顯高于pH7.4環(huán)境。
　　結(jié)論:
　　以香豆素和siRNA為模型藥物，以SA-H8陽離子聚合物為siRNA載體，用DSPE-PEG-pHLIP修飾脂質(zhì)體表面，采用薄膜分散法制備脂質(zhì)體，穩(wěn)定性良好。以人乳腺癌MCF-7為