鵝源糞腸球菌毒力因子fsrC的克隆表達(dá)和生物信息學(xué)分析.pdf

1、構(gòu)建pMD18-T-fsrC重組質(zhì)粒，將鵝源糞腸球菌毒力因子fsrC導(dǎo)入DH5α宿主菌，在克隆子中進(jìn)行自我復(fù)制;將構(gòu)建pET-28a-fsrC重組質(zhì)粒導(dǎo)入BL21工程菌，進(jìn)行轉(zhuǎn)錄、翻譯，并對(duì)fsrC蛋白檢測(cè)及生物信息學(xué)分析。
　　根據(jù)GenBank公布的糞腸球菌fsrC基因序列設(shè)計(jì)與合成引物;以鵝源糞腸球菌全基因組為模板，利用PCR技術(shù)獲得毒力因子fsrC基因片段，與pMD18-T克隆載體連接，導(dǎo)入DH5α宿主菌內(nèi)，進(jìn)行序列測(cè)定。

2、經(jīng)酶切后得到的毒力因子fsrC基因片段，與pET-28a表達(dá)載體連接，導(dǎo)入BL21工程菌內(nèi)，用IPTG誘導(dǎo)表達(dá)后，SDS-PAGE檢測(cè)fsrC蛋白。應(yīng)用生物信息學(xué)軟件對(duì)fsrC蛋白序列進(jìn)行多重比對(duì)，構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化發(fā)育樹狀圖;分析fsrC蛋白的理化性質(zhì)和組成成分;預(yù)測(cè)fsrC蛋白的結(jié)構(gòu)、fsrC mRNA的二級(jí)結(jié)構(gòu)、fsrC蛋白的亞細(xì)胞定位和fsrC蛋白的抗原表位。
　　成功克隆鵝源糞腸球菌毒力因子fsrC，其堿基序列為1326bp，

3、編碼441個(gè)氨基酸。成功構(gòu)建pET-28a-fsrC/BL21重組質(zhì)粒。SDS-PAGE檢測(cè)fsrC蛋白大小為51KD;鵝源糞腸球菌毒力因子fsrC蛋白的氨基酸所在位置106～109、132～133、169～170等處存在β-轉(zhuǎn)角結(jié)構(gòu)，91～92、130～132、167～169等處存在無規(guī)則卷曲結(jié)構(gòu);fsrC蛋白三級(jí)結(jié)構(gòu)顯示毒力因子fsrC蛋白在質(zhì)膜外形成3個(gè)結(jié)構(gòu)域，質(zhì)膜內(nèi)形成1個(gè)結(jié)構(gòu)域;fsrC mRNA二級(jí)結(jié)構(gòu)，顯示雙鏈結(jié)構(gòu)、內(nèi)部環(huán)

4、、發(fā)夾環(huán)、多分支環(huán)和單鏈區(qū)等多種mRNA二級(jí)結(jié)構(gòu)元件;fsrC蛋白分布在分泌通路信號(hào)肽(SP)和質(zhì)膜的比例較大;fsrC蛋白B細(xì)胞抗原表位，氨基酸序列第387～394位置共8個(gè)表位氨基酸，其余位置表位氨基酸數(shù)較少。
　　克隆出鵝源糞腸球菌毒力因子fsrC; fsrC蛋白在工程菌中得到表達(dá);生物信息學(xué)預(yù)測(cè)鵝源糞腸球菌毒力因子fsrC蛋白具有組氨酸蛋白激酶的功能和調(diào)控鵝源糞腸球菌明膠酶和絲氨酸蛋白酶表達(dá)的可能性;鵝源糞腸球菌毒力因子f