版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進(jìn)行舉報或認(rèn)領(lǐng)
文檔簡介
1、白血病抑制因子是白介素-6家族中的一種多效性細(xì)胞因子,可以多種方式作用于不同類型的細(xì)胞,其最顯著的作用是可以抑制胚胎干細(xì)胞的分化并保持其增殖能力。轉(zhuǎn)錄因子Oct4屬于POU家族中的第Ⅴ亞族,由POU5fl基因編碼,由未分化的胚胎干細(xì)胞表達(dá),其表達(dá)水平?jīng)Q定了胚胎干細(xì)胞的分化方向。Oct4還是制備誘導(dǎo)多能干細(xì)胞的關(guān)鍵因子。本研究的目的是克隆雞LIF、POUV基因、對其進(jìn)行生物信息學(xué)分析、構(gòu)建其原核表達(dá)載體并進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)。
實驗
2、1.以成年雞肝臟組織的總RNA為模板,經(jīng)RT-PCR技術(shù)擴(kuò)增出雞LIF基因,將其與pEASY-T1克隆載體連接,獲得重組質(zhì)粒pEASY-T1-chLIF,測序并進(jìn)行生物信息學(xué)分析,酶切重組質(zhì)粒pEASY-T1-chLIF,獲得正確克隆的雞LIF基因,將其與pET-30a原核表達(dá)載體連接,獲得重組質(zhì)粒pET-30a-chLIF。結(jié)果表明:(1)構(gòu)建了重組質(zhì)粒pEASY-T1-chLIF和pET-30a-chLIF;克隆的雞LIF基因全長5
3、64bp,共編碼188個氨基酸,與GenBank上公布的Gallus LIF(XM_418264)相比,核苷酸序列和氨基酸序列的同源性分別為99.8%、99.5%,無插入或缺失變異。(2)多物種LIF序列的比對結(jié)果表明,雞LIF與哺乳動物的LIF保守性較低,LIF基因存在種屬特異性。(3)雞LIF蛋白理論分子量為20.885KDa,等電點為9.342。(4)雞LIF蛋白是親水性蛋白,沒有跨膜結(jié)構(gòu)域。(5)雞LIF蛋白的二級結(jié)構(gòu)由48.6
4、6%的無規(guī)則卷曲、43.32%的α-螺旋和8.02%的伸展串組成,三級結(jié)構(gòu)由4個通過環(huán)連接的螺旋組成。
實驗2.實驗方法基本同上,不同的是作為模板的總RNA是從新出殼的小公雞睪丸組織中提取的,使用的克隆載體是pMD18-T,最后獲得了重組質(zhì)粒pMD18-T-chPOUV和pET-30a-chPOUV。將重組質(zhì)粒pET-30a-chPOUV轉(zhuǎn)化入大腸桿菌BL21(DE3),用IPTG誘導(dǎo)其表達(dá),通過SDS-PAGE和West
5、ren blot鑒定其表達(dá)的融合蛋白。結(jié)果表明:(1)構(gòu)建了重組質(zhì)粒pMD18-T-chPOUV和pET-30a-chPOUV;克隆的雞POUV基因完整的開放閱讀框全長888bp,共編碼295個氨基酸。與GenBank上公布的Gallus POUV(NM_001110178)相比,核苷酸序列和氨基酸序列的同源性分別為99.4%、98.6%。克隆的雞POUV基因全序列無插入或缺失變異。(2)多物種POUV序列的比對結(jié)果表明,POUV基因存
6、在種屬特異性,雞POUV與哺乳動物的POUV有一段高度保守的氨基酸序列位于雞POUV的第83~227位氨基酸,可能是雞POUV蛋白的功能決定域。(3)雞POUV蛋白理論分子量為33.229KDa,等電點為9.791。(4)雞POUV蛋白是親水性蛋白,沒有跨膜結(jié)構(gòu)域,其氨基酸序列的N端沒有信號肽。(5)雞POUV蛋白的二級結(jié)構(gòu)由53.22%的無規(guī)則卷曲、33.56%的α-螺旋和13.22%的伸展串組成,三級結(jié)構(gòu)由兩個多螺旋結(jié)構(gòu)中間通過環(huán)連
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 大乳頭水螅forkhead基因的克隆、生物信息學(xué)分析及原核表達(dá).pdf
- 大乳頭水螅Wnt-3基因的克隆、生物信息學(xué)分析及原核表達(dá).pdf
- 大乳頭水螅原癌基因c-Myc的克隆、生物信息學(xué)分析及原核表達(dá).pdf
- 豆科植物生物鐘調(diào)控的生物信息學(xué)分析及GmLHY基因的克隆和原核表達(dá).pdf
- 鵝源糞腸球菌毒力因子gelE的克隆、原核表達(dá)及生物信息學(xué)分析.pdf
- 肝癌相關(guān)抗原KINECTIN蛋白的生物信息學(xué)分析及KINECTIN基因片段的原核表達(dá).pdf
- 植物ADH基因家族的生物信息學(xué)分析及棉花Zn結(jié)合脫氫酶的克隆與原核表達(dá).pdf
- 葡萄ACS基因的電子克隆及生物信息學(xué)分析.pdf
- 胃癌相關(guān)新基因的克隆及生物信息學(xué)分析.pdf
- 豬鐵代謝相關(guān)基因的克隆、生物信息學(xué)分析及表達(dá)分布.pdf
- 25850.雞fatp1基因cdna的克隆、組織表達(dá)及其生物信息學(xué)分析
- 31001.斑馬魚干擾素γ基因克隆表達(dá)及生物信息學(xué)分析
- 大白菜BrTCP基因的克隆及生物信息學(xué)分析.pdf
- 擬南芥AtDPBF4基因克隆、生物信息學(xué)分析與表達(dá)研究.pdf
- 甜菜硝酸還原酶基因克隆及生物信息學(xué)分析.pdf
- 大豆C4H基因克隆及生物信息學(xué)分析.pdf
- myc基因的生物信息學(xué)分析
- 豬同源基因Nectin-3的克隆、表達(dá)及初步生物信息學(xué)分析.pdf
- 中國綠水螅抗壞血酸鹽過氧化物酶基因的克隆、生物信息學(xué)分析及原核表達(dá).pdf
- 人ALEX2基因的克隆、表達(dá)與純化及生物信息學(xué)分析.pdf
評論
0/150
提交評論