膠孢炭疽菌侵染柿樹的細(xì)胞學(xué)研究及CGTA1基因的克隆.pdf

1、柿樹炭疽病在全世界產(chǎn)柿國(guó)家均有發(fā)生。近年來，在浙江淳安地區(qū)無核柿(Diospyros kaki cv.Wuheshi)上柿樹炭疽病發(fā)病嚴(yán)重，給當(dāng)?shù)厥翗洚a(chǎn)業(yè)發(fā)展造成了嚴(yán)重?fù)p失，成為可持續(xù)發(fā)展的瓶頸；侵染無核柿的炭疽菌是由膠孢炭疽病菌(Colletotrichum gloeosporioides Penz.)引起的。病原菌侵染柿樹枝條互作過程中，也發(fā)現(xiàn)柿樹炭疽菌也具有兩種營(yíng)養(yǎng)階段，初生菌絲可穿透寄主細(xì)胞壁從一個(gè)細(xì)胞進(jìn)入另一個(gè)細(xì)胞，并且在寄主

2、互作界面上也形成界面基質(zhì)，非常相似于菜豆炭疽菌侵染寄主的細(xì)胞學(xué)特征。炭疽菌為了侵入寄主組織，采用各種侵染策略，提供了研究真菌致病性的分子和細(xì)胞學(xué)極好的模式。本文主要說明葉柄和枝條在不同的發(fā)育階段對(duì)炭疽病發(fā)生和發(fā)展的影響，從細(xì)胞學(xué)水平上揭示成熟組織抗病的機(jī)制；為了說明膠孢炭疽菌活體營(yíng)養(yǎng)向死體營(yíng)養(yǎng)的轉(zhuǎn)換機(jī)制，并克隆了膠孢炭疽菌CGTA1。 1、柿樹器官發(fā)育對(duì)炭疽病發(fā)生的影響通過人工接種柿樹炭疽菌在不同發(fā)育時(shí)期的無核柿葉柄和枝條，證明

3、感病的無核柿葉柄和枝條隨著發(fā)育對(duì)炭疽病抗性增強(qiáng)，主要表現(xiàn)為病害潛育期延長(zhǎng)，第3次接種(5月25日)比第1次接種(4月15日)在葉柄上病害潛育期延長(zhǎng)52h，在枝條上可推遲40 h。侵染過程的細(xì)胞學(xué)研究表明，接種72h后，在成熟葉柄中當(dāng)大的初生菌絲在穿透寄主細(xì)胞壁時(shí)變細(xì)，然后直接穿透寄主細(xì)胞壁，又形成膨大的初生菌絲，并從初生菌絲上產(chǎn)生次生菌絲。比較原先的研究結(jié)果認(rèn)為，葉柄發(fā)育影響了炭疽菌從活體營(yíng)段向死體營(yíng)養(yǎng)階段的轉(zhuǎn)化，使活體營(yíng)養(yǎng)存在時(shí)間延長(zhǎng)

4、，從而也使病害潛育期延長(zhǎng)。 2、膠孢炭疽菌CGTA1基因的克隆根據(jù)菜豆炭疽的CLTA1基因及其同源真菌鋅簇轉(zhuǎn)錄因子基因的分析，設(shè)計(jì)簡(jiǎn)并引物，擴(kuò)增膠胞炭疽基因組DNA獲得一個(gè)長(zhǎng)度為687bp的基因片段。該基因片段與CLTA1基因?qū)?yīng)序列相比，大小僅相差兩個(gè)堿基，同源性為67.24％，說明獲得片段是目的基因片段。 根據(jù)該基因片段設(shè)計(jì)嵌套的特異引物，用TAIL-PCR方法從膠孢炭疽菌基因組DNA中擴(kuò)增該基因片段兩端側(cè)翼序列，獲