核酸測序法檢測HCV基因型及分子流行病學研究.pdf

1、目的：
　　丙型肝炎病毒(HCV)感染所致丙型肝炎為全球傳染性疾病，是導致慢性肝病、肝硬化和肝細胞癌的主要原因之一。HCV基因型在HCV感染、傳播、預后及抗病毒治療效果等方面有重要意義，同時能夠給流行病學研究提供重要依據(jù)。HCV基因組具有高度的變異性，根據(jù)基因組核苷酸序列的差異，HCV被分為6種基因型。近年來，雖然國內(nèi)關(guān)于HCV基因型分布的報道逐漸增多，但存在地域性差異及選用分型方法不同等問題。因此，為了更好的了解中國HCV的分子

2、流行病學特征，我們使用核酸測序法對國內(nèi)11個省份的307例HCV標本進行基因型檢測，通過分析本研究結(jié)果，深入地探討我國HCV基因型及亞型的地域分布以及分子流行病學特征，為中國的HCV感染的相關(guān)研究提供有價值的資料。
　　方法：
　　收集307份來自我國不同地區(qū)的HCV感染者血清標本，使用HCV核酸定量檢測試劑提取HCV RNA，實時PCR定量檢測HCV RNA載量；同時使用RNA提取試劑提取HCV RNA，反轉(zhuǎn)錄PCR法擴增

3、HCV Core/E1區(qū)基因片段，對擴增產(chǎn)物進行測序，然后使用NCBI基因分型工具確定基因亞型，分析我國基因型與基因亞型的地域分布特征，以及基因型與宿主性別、年齡和病毒載量的關(guān)系。
　　結(jié)果：
　　1.在307例HCV標本中，共檢測出6個基因亞型，1b型占50.8％(156/307)，2a型占19.9％(61/307)，3a型占10.7％(33/307)，3b和6a型各占8.1％(25/307)；1a型占2.3％(7/307

4、)，3a、3b、6a和1a型合計占29.3％(90/307)。
　　2.296例可測得載量的HCV標本，80.7％(239/296)的標本屬于高HCV RNA載量組(>106IU/mL)。在高、中、低載量組中，1b型均有較高檢出率，但中載量組(500-106IU/mL)中以2a型檢出為主，占58.5％(24/41)。
　　3.HCV基因型與地域分布、性別、年齡
　　(1)地域分布：HCV基因亞型分布表現(xiàn)出地域性差異，各

5、省份HCV基因型檢出率有所差別。南方以1b型為主，占50.0％(97/194)，其次為3a型，占16.0％(31/194)；北方以1b型為主要基因型，占52％(59/113)，其次為2a型，占42.5％(48/113)；南北方之間，HCV基因型分布存在差異(P<0.01)。
　　(2)性別分布：性別資料明確的286例標本，男女基因型分布總體上無顯著差異(χ2=7.102，p>0.05)，6a型在男女間分布存在顯著差異(χ2=8.7

6、41，p<0.01)，男女間其他基因型分布沒有差異(p>0.01)。
　　(3)年齡分布：年齡資料明確的274例HCV標本，基因型在各年齡分布存在顯著差異(χ2=62.322，p<0.05)。1b、2a型在各年齡組檢出率均較高，主要分布在≥31歲以上患者中；21-30歲和31-40歲年齡組中，基因型分布趨于均衡，1b和2a兩型分別占44％和50％，非1b、2a型感染總和≥50％。
　　結(jié)論：
　　本研究結(jié)果表明，在我國