上海地區(qū)豬戊型肝炎流行病學(xué)調(diào)查和基因型分析.pdf

1、戊型肝炎( Hepatitis E，HE)屬于人畜共患病，是由戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus，HEV)引起，該病對(duì)人類健康具有很大的危害.HEV在動(dòng)物宿主中以豬的感染率最高，病毒載量最大，而且從中分離到的病毒和人源毒株也有較高的同源性.因此，摸清豬群中該病的存在狀況，對(duì)防控人戊型肝炎的發(fā)生具有重要的公共衛(wèi)生學(xué)意義。 為了能夠準(zhǔn)確的了解上海地區(qū)戊型肝炎在豬群中的流行情況，從上海市10個(gè)轄區(qū)的40個(gè)豬場中

2、采集918份糞便樣品，其中444份為首次采集，474份為追蹤調(diào)查采集。通過nes ted-PCR的方法，擴(kuò)增HEV ORF2的部分片斷，通過測序和系統(tǒng)進(jìn)化分析來研究病毒的存在狀況。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，918份份樣品中的220份樣品為HEVRNA陽性，陽性率24％。全過程分析顯示各個(gè)豬場陽性率在0.0％-75％之間，在36號(hào)豬場中同時(shí)發(fā)現(xiàn)基因3型和基因4型存在，并進(jìn)行連續(xù)追蹤調(diào)查，結(jié)果顯示該豬場基因4型在感染中占主導(dǎo)優(yōu)勢(shì).選擇部分陽性樣品PCR

3、產(chǎn)物，擴(kuò)增的片斷克隆T載體，進(jìn)行測序。系統(tǒng)進(jìn)化分析表明，基因4型HEV共有28株，和上海地區(qū)從人體內(nèi)分離到的兩株戊肝病毒有很高的同源性?；?型HEV共有14株，在進(jìn)化樹中，這些病毒株形成一個(gè)新的分支，但是和一株日本離株較高的同源性.這說明基因3型在上海分布已經(jīng)較為廣泛，但在以前的研究顯示，中國境內(nèi)豬群中只存在基因4型，因而其來源還需進(jìn)一步研究。 用北京萬泰生物藥業(yè)有限公司提供的動(dòng)物用HEV總抗體檢測試劑盒，采用雙抗原夾心法，檢

4、測來自上海某豬場的4周齡、8周齡、16周齡和經(jīng)常母豬血清樣品118份，以了解該豬場HEV抗體的存在情況.同時(shí)用RT-nPCRA方法檢測血清中HEV RNA.結(jié)果顯示：抗體總陽性率為90.7％(107/118)，其中4周齡、8周齡、16周齡和經(jīng)常母豬抗體陽性率分別為：85.7％(30/35)、88％(32/35)、94％(33/35)、92.3％(12/13)。血清中HEV RNA陽性率為10.2％(12/118).結(jié)果表明該豬場HEV抗

5、體陽性率高，而血清中HEV RNA陽性率較低，并且在較高抗體水平血清中可以檢測出HEV RNA陽性。 為了進(jìn)一步了解，HEV不同基因型是否存在混合感染，參照中國流行基因型，設(shè)計(jì)兩套型特異性引物進(jìn)行擴(kuò)增，基因4型目的片段為440bp，位于ORF1和ORF2結(jié)合處，基因3型目的片段為ORF2內(nèi)的164bp，發(fā)現(xiàn)同一個(gè)體內(nèi)同時(shí)存在基因4型和基因3型HEV.其中4型分離株SW-CSH4與中國分離株T21同源性高達(dá)94.5％，而與其他基因