8-十六烷基小檗堿的合成和藥代動力學(xué)研究.pdf

1、小檗堿(BBR)為異喹啉生物堿，是黃連所含活性成分中最主要的生物堿之一，長期被傳統(tǒng)中醫(yī)藥用于治療由細(xì)菌感染所引起的胃腸道疾病。近年來，大量研究表明，BBR還具有抗高血壓、降糖、調(diào)脂、抗心律異常、抗腫瘤、抗焦慮、抗細(xì)菌和病毒以及抗氧化等生理作用。
　　8-十六烷基小檗堿（8-BBR-C16）是BBR的長鏈烷基衍生物，它的合成旨在通過對BBR原型的親脂性改造，增強藥理活性，擴大治療和應(yīng)用范圍。本課題以8-BBR-C16為研究目標(biāo)，BB

2、R和8-辛基小檗堿(8-BBR-C8)為比較對象，對烷基化后的8-BBR-C16進行了藥代動力學(xué)比較研究，并分析了其在大鼠尿中的代謝產(chǎn)物和代謝途徑。具體內(nèi)容包括:
　　1.8-BBR-C16的合成及結(jié)構(gòu)鑒定
　　本論文所采用的合成方法是格氏試劑法。合成時以一條16個碳的直鏈為取代基，對BBR C8位進行親脂性取代。并運用紅外光譜、核磁共振、液質(zhì)聯(lián)用(LC/MS/MS)等方法對所得的8-BBR-C16進行了結(jié)構(gòu)確證。
　

3、　2.生物樣品中BBR、8-BBR-C8和8-BBR-C16的高效液相色譜(HPLC)定量分析方法和固相萃取(SPE)前處理方法的建立
　　HPLC的檢測條件為:以乙腈-20 mmol·L-1磷酸二氫鉀溶液為流動相，色譜柱Phenomenex Luna C8(5μm，250 mm×4.6 mm)進行分離。分離時柱溫:30℃，流速:1 mL·min-1，檢測波長（紫外檢測器）:345 nm;進樣量:100μL。用該方法對血漿樣品進行

4、檢測，經(jīng)驗證，標(biāo)準(zhǔn)曲線、最低定量限(LLOQ)、回收率、精密度和穩(wěn)定性均符合生物樣品定量分析的要求。
　　檢測組織樣品時，建立了穩(wěn)定、通量較高的固相萃取(SPE)前處理方法，從組織樣本中提取BBR、8-BBR-C8和8-BBR-C16。所用的條件為:以二氯甲烷為提取液，勻漿提取后過SPE小柱（美國watwers公司，Silica Catridges硅膠固相萃取柱）凈化，再用前述HPLC檢測含量。此方法經(jīng)驗證也符合生物樣品定量分析的

5、要求。
　　3.8-BBR-C16在大鼠血漿中的藥代動力學(xué)比較研究
　　單次口服給藥大鼠80 mg·kg-1的BBR、8-BBR-C8和8-BBR-C16，于給藥后0.5h、1h、1.5h、2h、3h、4h、6h、8h、12h、24h、36h、48h和72 h，每個時間點采血進行藥代動力學(xué)研究(n=5)。采用HPLC進行定量測定，用非房室模型進行藥動力學(xué)參數(shù)計算。
　　藥動學(xué)結(jié)果表明，與BBR和8-BBR-C8相比，8

6、-BBR-C16表現(xiàn)出如下特征:
　　(1)Cmax明顯變大，由原型BBR的45.92μg·L-1提高為129.41μg·L-1。
　　(2)生物利用度顯著提高。與8-BBR-C16相比，BBR和8-BBR-C8相對生物利用度僅分別為7.7％和13.6％。
　　(3)藥物的消除變慢，在體內(nèi)的滯留和循環(huán)時間延長，半衰期更長，BBR和8-BBR-C8的t1//2分別為3.61h、5.10h，而8-BBR-C16為11.90

7、 h。
　　(4)8-BBR-C16的平均血藥濃度-時間曲線存在明顯的雙峰。
　　分析認(rèn)為，造成8-BBR-C16藥動學(xué)規(guī)律發(fā)生顯著變化和生物利用度提高的原因是，長鏈烷基提高了先導(dǎo)藥物的脂溶性，使藥物更容易通過生物膜的脂質(zhì)雙分子層。
　　4.8-BBR-C16在大鼠組織中的分布比較研究
　　取前面第3節(jié)中，單次口服給藥80 mg·kg-1藥物的大鼠，處死采集1h，3h，8h和12h的心、肝、脾、肺、腎、腦、子宮、

8、睪丸、胃和小腸(n=5)，測定藥物在大鼠組織中的分布濃度。采用SPE進行組織樣品前處理，HPLC進行定量測定。
　　組織分布結(jié)果表明，與BBR和8-BBR-C8相比，8-BBR-C16的組織分布具有如下特征:
　　(1)所有組織中，8-BBR-C16的藥物濃度大幅提高。
　　(2)8-BBR-C16在體內(nèi)各組織的分布比例發(fā)生了改變，更趨向于肺和脾。特別是肺中的濃度最高，大于其他組織中濃度的總和（不包括小腸和胃時），具有

9、明顯的肺靶向性。這與肺組織具有較好的親脂性有關(guān)。
　　(3)8-BBR-C16在組織中的分布也更為廣泛。例如，在大腦和睪丸中的分布發(fā)生了從無到有的轉(zhuǎn)變。
　　分析認(rèn)為，造成這些顯著變化的原因在于組織的毛細(xì)血管內(nèi)膜和組織內(nèi)膜為多孔性的脂質(zhì)膜，烷基化后的藥物具有較高的脂溶性可以使其容易地通過內(nèi)膜到達組織內(nèi)部。
　　5.8-BBR-C16的大鼠尿、糞排泄比較研究
　　單次口服給藥大鼠80 mg·kg-1的8-BBR-C

10、16、8-BBR-C8和BBR后，置代謝籠中，分別收集0-6 h，6-12h，12-18 h，18-24 h，24-30 h，30-36 h，36-42 h，42-48 h，48-60 h，60-72 h和72-96 h各時間段的尿樣及糞樣（n=5），測定藥物在大鼠尿和糞中的排泄量。采用SPE進行樣品前處理，HPLC進行含量測定。
　　尿、糞排泄實驗結(jié)果表明，與BBR和8-BBR-C8相比，8-BBR-C16的排泄規(guī)律發(fā)生了顯著變

11、化:
　　(1) BBR、8-BBR-C8和8-BBR-C16在96 h的尿累積排泄百分率分別為0.0291％、0.0148％和0.0014％。其中，8-BBR-C16自尿的排泄與前兩者相比，下降了一個數(shù)量級，8-BBR-C16的排泄量僅占BBR的4.8％。
　　(2) BBR、8-BBR-C8和8-BBR-C16在96 h的糞累積排泄百分率分別為76.9％、51.7％和20.5％?？诜螅?jīng)尿排泄不是小檗堿及其烷基化衍生物

12、的主要排泄途徑，這類化合物的主要排泄途徑是糞。
　　分析認(rèn)為，造成8-BBR-C16尿、糞排泄量顯著減少的原因為:藥物代謝途徑廣泛、吸收效率增加和組織濃度較高。
　　6.8-BBR-C16在大鼠尿液中的主要代謝產(chǎn)物和代謝途徑研究
　　單次口服給藥大鼠40 mg·kg-1的8-BBR-C16，每三天一次，置代謝籠中收集尿液。將所收集的尿液過大孔樹脂脫鹽后，用薄層色譜和HPLC對代謝產(chǎn)物進行初步分析，再將上述凈化后尿液用L