小檗堿聯(lián)合紫杉醇經(jīng)Caco-2細胞轉(zhuǎn)運機制和藥代動力學研究.pdf

1、本實驗分為兩部分，第一部分利用Caco-2細胞模型對小檗堿聯(lián)合紫杉醇的腸吸收和外排機制做了初步研究；第二部分根據(jù)Caco-2細胞模型實驗結(jié)果，對小檗堿和紫杉醇在大鼠體內(nèi)的藥代動力學進行了進一步的研究。 第一部分：紫杉醇和小檗堿在Caco-2細胞模型中的轉(zhuǎn)運機制。 研究目的：應用Caco-2細胞模型研究小檗堿對紫杉醇腸吸收的影響，探討小檗堿對紫杉醇吸收影響的原因。 研究方法：采用Caco-2細胞單層模型研究紫杉醇的

2、雙向轉(zhuǎn)運，并考察時間，紫杉醇濃度，能量抑制劑疊氮化鈉(NaN3)和P-gp抑制劑維拉帕米和小檗堿對紫杉醇吸收的影響。用高效液相色譜法檢測藥物濃度。計算其表觀滲透系數(shù)。 研究結(jié)果：發(fā)現(xiàn)紫杉醇在Caco-2細胞模型中，從Caco-2單層細胞基底端(basolateralside，BL)到頂端(apicalside,AP)的表觀滲透系數(shù)為5.5-99.33×10-6(cm/sec)，頂端(AP)到基底端(BL)的表觀滲透系數(shù)為2.26

3、-11.95×10-6(cm/sec)，BL-＞AP的Papp值為AP-＞BL的2.5-8.3倍，基底端到頂端藥物吸收隨時間和濃度的增加呈飽和趨勢，P-gp抑制劑維拉帕米(50μM)和小檗堿(100μM)能使紫杉醇(5μM)AP-＞BL的Papp值分別增加4.3和5.0倍。 研究結(jié)論：紫杉醇在Caco-2細胞模型中的吸收主要是由載體介導的主動轉(zhuǎn)運，且該主動轉(zhuǎn)運的載體位于Caco-2細胞單層的頂端，紫杉醇是P-gp的底物，在轉(zhuǎn)運過

4、程中受到P-gp的外排，維拉帕米和小檗堿均能促進紫杉醇(AP-＞BL)的轉(zhuǎn)運。 第二部分：小檗堿聯(lián)合紫杉醇在大鼠體內(nèi)的藥物動力學。 研究目的：為了提高紫杉醇的口服生物利用度，本實驗應用副作用較少的P糖蛋白抑制劑小檗堿聯(lián)合紫杉醇灌胃給予大鼠，同時環(huán)孢素A聯(lián)合紫杉醇灌胃給藥為陽性對照。探討不同劑量小檗堿對紫杉醇在大鼠體內(nèi)藥代動力學的影響。 研究方法：對照組，以單獨灌胃方式給予紫杉醇(30mg/kg)混懸液；在聯(lián)合用藥

5、組，分別給予SD大鼠小檗堿(10,20,40mg/kg)30min后再灌胃給予紫杉醇(30mg/kg)混懸液；陽性對照組，環(huán)孢素A(30mg/kg)30min后再灌胃給予紫杉醇(30mg/kg)混懸液，按實驗設計時間點在大鼠右頸靜脈采血，高效液相色譜法檢測血漿藥物濃度。 研究結(jié)果：與單獨口服紫杉醇(30mg/kg)比較，小檗堿能顯著提高紫杉醇在大鼠體內(nèi)的血藥濃度(P＜0.05，20mg/kg,P＜0.01,40mg/kg)。藥時

6、曲線下面積與單用紫杉醇對照組比較有顯著提高(P＜0.05，20mg/kg,P＜0.01,40mg/kg)，曲線下面積隨小檗堿劑量增加而加大。小檗堿(10,20,40mg/kg)同時給予紫杉醇(30mg/kg)的峰濃度(Cmax)與單用紫杉醇對照組比較除了小檗堿(10mg/kg)組外均有顯著提高(P＜0.05，20mg/kg,P＜0.01，40mg/kg)，峰濃度(Cmax)隨小檗堿劑量增加而加大。三個劑量組小檗堿(10,20,40mg/

7、kg)同時給予紫杉醇(30mg/kg)的達峰時間(Tmax)隨小檗堿劑量增加而減小。三個劑量組小檗堿(10,20,40mg/kg)同時給予紫杉醇(30mg/kg)的半衰期(T1/2)隨小檗堿劑量增加而增加。聯(lián)合應用三個劑量組小檗堿(10,20,40mg/kg)的紫杉醇的相對生物利用度(RB％)分別為單用紫杉醇對照組的1.2，1.6，2.1倍。與陽性對照環(huán)孢素A(30mg/kg)同時給予紫杉醇(30mg/kg)組比較，小檗堿(40mg/k