非小細(xì)胞肺癌中抑癌基因PTEN突變、表達(dá)及相關(guān)信號通路與腫瘤發(fā)生發(fā)展及預(yù)后的相關(guān)性研究.pdf

1、肺癌是最常見、最具有危險性的惡性腫瘤之一，五年生存率較低，而80％肺癌為非小細(xì)胞肺癌（non-small cell of 1ung cancer，NSCLC），其發(fā)生、發(fā)展是多因素多步驟參與的過程。由PTKs（蛋白質(zhì)酪氨酸激酶）和PTPs（蛋白質(zhì)酪氨酸磷酸酶）精確調(diào)控的蛋白質(zhì)酪氨酸磷酸化水平在此過程中起重要作用。而很多PTKs都是由原癌基因或癌基因編碼的，因此某些PTPs可能在體內(nèi)起抑癌基因的作用，這個結(jié)論直到PTEN/MMAC1/TE

2、P1（后簡稱PTEN）基因發(fā)現(xiàn)后才得到證實。作為第一個編碼PTPs的抑癌基因即第10號染色體同源丟失性磷酸酶一張力蛋白基因（phoshatase and tension homology deleted on chromosome ten，PTEN），自1997年3月以來先后被國際上三個科研小組分別克隆后立即成為分子生物學(xué)、細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和腫瘤病理等領(lǐng)域的研究熱點，一些研究已經(jīng)證明它與腫瘤的形成，尤其進(jìn)展有關(guān)。Li和Steck等首先對為數(shù)

3、不多的腦腫瘤、前列腺癌及乳腺癌腫瘤細(xì)胞株和一些原發(fā)腫瘤進(jìn)行該基因的初步檢測，均發(fā)現(xiàn)了不同形式的體細(xì)胞性突變（somatic mutation）。然而對于非小細(xì)胞肺癌發(fā)生、發(fā)展過程中是否有PTEN基因的突變報道較少，至于其蛋白水平的改變，結(jié)論尚不一致。
　　 方法：
　　 收集有完整隨訪資料的61例非小細(xì)胞肺癌及20例癌旁正常肺組織蠟塊，其中30例非小細(xì)胞肺癌組織抽提DNA，PCR擴(kuò)增PTEN基因第3、5、7、8外顯子，瓊

4、脂糖凝膠電泳鑒定擴(kuò)增產(chǎn)物，有條帶者DNA測序；所有蠟塊均使用免疫組化SP法檢測組織中PTEN、PI3K和P-Akt蛋白的表達(dá)情況；計數(shù)資料采用率表示，不同組間比較用x2檢驗，生存分析采用Kaplan-Meier法進(jìn)行單因素分析及Log-rank檢驗，并用Cox比例風(fēng)險模型進(jìn)行多因素分析。
　　 結(jié)果：
　　 測序結(jié)果顯示，僅1例標(biāo)本（臨床Ⅳ期、低分化、T3N2M1期、術(shù)后生存12個月）發(fā)生了PTEN基因外顯子5、7、8的

5、純和性丟失。余29例NSCLC標(biāo)本中發(fā)現(xiàn)了2類2例突變位點的存在，這2類突變均位于內(nèi)含子中：第7外顯子3’-側(cè)翼下游46bp處檢測到的一個G→A（116033）點突變，在第8外顯子5’-側(cè)翼上游2bp和3bp之間（11859-11860）插入了一個T。
　　 免疫組化結(jié)果顯示：NSCLC組織標(biāo)本中PTEN蛋白的表達(dá)低于癌旁正常肺組織；肺腺癌標(biāo)本中PTEN蛋白表達(dá)較高；PTEN蛋白表達(dá)隨NSCLC患者最初發(fā)現(xiàn)時臨床分期的增加及出現(xiàn)

6、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移而降低；PTEN蛋白在術(shù)后生存期≥4年的患者中表達(dá)較高（P<0.05）。PTEN蛋白表達(dá)在不同年齡組及不同分化程度組的NSCLC組織中差異無顯著性（P>0.05）。
　　 Spearson相關(guān)性檢驗顯示：NSCLC組織中PTEN與PI3K/Akt蛋白表達(dá)成負(fù)相關(guān)，證實了PTEN和PI3K/Akt信號通路的負(fù)向調(diào)控關(guān)系。
　　 Cox比例風(fēng)險模型顯示：在眾多的影響因子中僅吸煙和PTEN陰性表達(dá)為影響NSCLC患者