癌基因AURKA在腫瘤發(fā)生發(fā)展中作用機(jī)制的研究.pdf

1、AURKA基因編碼一個(gè)進(jìn)化上保守的絲氨酸/蘇氨酸激酶,是Aurora激酶家族成員之一。在有絲分裂中,AURKA通過(guò)參與中心體的分離和成熟以及紡錘體兩極的建立,確保有絲分裂中染色體的正確分離和胞質(zhì)分裂的順利完成,在細(xì)胞周期中起著重要作用。AURKA的異常擴(kuò)增和/或高表達(dá)常見(jiàn)于多種人類腫瘤。近年來(lái)的研究表明,AuRKA可參與多條重要的細(xì)胞信號(hào)通路,作為激酶直接或間接地激活多種致癌蛋白、或使多種抑癌蛋白失活,從而推動(dòng)腫瘤的發(fā)生發(fā)展。
　

2、　 為了進(jìn)一步探討AURKA在腫瘤發(fā)生發(fā)展中的作用機(jī)制,我們對(duì)AURKA過(guò)表達(dá)后在基因表達(dá)調(diào)控中處核心位置的細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)錄因子進(jìn)行了研究。我們利用一種轉(zhuǎn)錄因子活性芯片,在AURKA可誘導(dǎo)表達(dá)體系里,發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)錄因子E2Fl的轉(zhuǎn)錄活性在AURKA誘導(dǎo)表達(dá)后升高。對(duì)AURKA與E2F1之間的調(diào)控研究發(fā)現(xiàn)在腫瘤組織里AURKA與E2F1表達(dá)具有相關(guān)性,AURKA過(guò)表達(dá)和敲降可引起E2F1蛋白水平相應(yīng)變化。降解實(shí)驗(yàn)表明AURKA過(guò)表達(dá)可以延緩E2F1

3、依賴于蛋白酶體的泛素化降解,促進(jìn)E2目的累積。隨后,我們還發(fā)現(xiàn)AURKA的過(guò)表達(dá)可以誘導(dǎo)microRNA-17-92的表達(dá)上調(diào),而這種作用至少部分依賴于E2F1。
　　 為了研究AURKA導(dǎo)致的耐藥性問(wèn)題,我們建立了AURKA穩(wěn)轉(zhuǎn)食管癌細(xì)胞系,發(fā)現(xiàn)AURKA高表達(dá)可促進(jìn)抗凋亡活性；利用一種凋亡芯片篩選得到了具有抗凋亡效應(yīng)的基因PAK7,并且發(fā)現(xiàn)AURKA通過(guò)E2F1誘導(dǎo)PAK7的表達(dá),敲降PAK7可部分逆轉(zhuǎn)AURKA的抗凋亡活性

4、。對(duì)PAK7的進(jìn)一步深入研究發(fā)現(xiàn)PAK7在食管癌細(xì)胞系和組織標(biāo)本中高表達(dá),臨床參數(shù)分析顯示PAK7與食管癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和腫瘤分期存在正相關(guān)關(guān)系,并且PAK7高表達(dá)可促進(jìn)食管癌細(xì)胞的遷移能力,轉(zhuǎn)化NIH3T3細(xì)胞,使其在免疫缺陷的裸鼠中形成腫瘤,提示PAK7可能是一個(gè)潛在的候選癌基因。
　　 為了更全面地了解AURKA過(guò)表達(dá)后E2目的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié),我們用ChIP-chip的方法檢測(cè)了全基因組水平E2F1結(jié)合啟動(dòng)子的狀況。應(yīng)用兩種不同的

5、分析工具,對(duì)E2F1轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)的動(dòng)態(tài)變化進(jìn)行分析后發(fā)現(xiàn):在AURKA高表達(dá)0-24小時(shí)期間,E2F1下游靶基因主要富集于EGF等信號(hào)通路,而在24-48小時(shí),E2F1下游靶基因主要富集于VEGF、wnt/β-catenin等信號(hào)通路,從48小時(shí)內(nèi)整體變化來(lái)看,啟動(dòng)子與E2F1結(jié)合的基因主要集中于腫瘤發(fā)生發(fā)展相關(guān)的信號(hào)通路以及TGF-β通路等,提示AURKA高表達(dá)可能通過(guò)E2F1對(duì)細(xì)胞周期進(jìn)展具有促進(jìn)作用。
　　 總之,AURKA是