Bacillus cereus B-02對(duì)Botrytis cinerea抑菌活性及拮抗機(jī)制的研究.pdf

1、采用平板培養(yǎng)法和瓊脂孔擴(kuò)散法檢測(cè)蠟樣芽孢桿菌(Bacillus cereus)B-02的抑菌活性，觀(guān)察到B-02菌株及其代謝產(chǎn)物對(duì)灰霉病致病菌灰葡萄孢菌(Botrytis cinerea)均有明顯的、不同程度的抑菌作用，其中，不同稀釋濃度Ba. cereus B-02過(guò)濾液對(duì)Bo. cinerea菌絲生長(zhǎng)有明顯的抑制作用，并且起主要抑菌作用。在24～48h內(nèi)B-02可以通過(guò)生防菌代謝產(chǎn)物在培養(yǎng)基中的擴(kuò)散而對(duì)靶標(biāo)真菌形成一定寬度的抑菌帶。

2、抑菌帶旁的菌絲均不能正常向四周生長(zhǎng)，導(dǎo)致菌絲在菌落中央堆積，顏色加深，呈灰褐色或黑褐色。 鑒于Ba. cereus B-02胞外物質(zhì)對(duì)病原真菌起主要抑菌作用，因而嘗試用分離大分子蛋白質(zhì)類(lèi)物質(zhì)常用的方法——(NH<,4>)<,2>SO<,4>沉淀法和乙醇沉淀法來(lái)提取抑菌活性成分，得到的沉淀部分均無(wú)抑菌活性，觀(guān)察到抑菌活性成分仍存在于上清液中。菌株發(fā)酵液在121℃高溫滅菌30min后對(duì)病原菌仍具有較強(qiáng)的抑菌作用，說(shuō)明B-02抑菌活性

3、成分具有良好的熱穩(wěn)定性。 為研究培養(yǎng)條件對(duì)Ba. cereus B-02菌株生長(zhǎng)和抑菌活性的影響，分別采用分光光度計(jì)法、瓊脂孔擴(kuò)散法和杯碟法測(cè)定了B-02菌株的菌體量和抑菌活性。系統(tǒng)研究了B-02在不同液體培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)曲線(xiàn)、pH值和抑菌活性的變化，表明NB培養(yǎng)基較適合于液體搖培，其菌量達(dá)到高峰的時(shí)期是16h之后且抑菌帶寬度達(dá)到5mm。同時(shí)，B-02菌株在裝液量50ml/250ml和接種量1％(0.5ml/50ml)、搖床轉(zhuǎn)速1

4、40r/min，32℃，初始pH9.0的NB培養(yǎng)液中振蕩培養(yǎng)36h，其代謝產(chǎn)物的抑菌活性作用最為明顯，較初始培養(yǎng)條件增加了16.2％。 借助光學(xué)顯微鏡、掃描電子顯微鏡、透射電子顯微鏡和激光掃描共聚焦顯微鏡，從細(xì)胞形態(tài)學(xué)和生理學(xué)水平上研究Ba. cereus B-02過(guò)濾液對(duì)Bo. cinerea的拮抗機(jī)理。結(jié)果表明，B-02的代謝物質(zhì)能夠明顯抑制病菌孢子萌發(fā)，一定濃度下可以使菌絲畸形，細(xì)胞崩解，內(nèi)含物外泄，最終導(dǎo)致病菌喪失繁殖能