LvDscam介導(dǎo)的對(duì)蝦獲得性免疫識(shí)別及細(xì)胞吞噬的機(jī)理研究.pdf

1、DissertationSubmittedtoZhejiangGongshangUniversityforMaster’SDegreeofEngineeringRoleofLitopenaeusvannameiDscam(LvDscam)inadaptiveimmuneimeractionandphagocytosisAuthor：TaopingLiMajor：FoodEngineeringSupervisor：AssociatePro

2、fessorLinglinFuJan2015CollegeofFoodScienceandBiotechnologyZhejiangGongshangUniversityHangzhou，310018，PRChina浙江工商大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文異性序列。鑒于此，本研究利用酵母雙雜交技術(shù)進(jìn)一步深入的驗(yàn)證VP28免疫刺激后LvDscam形成的可變區(qū)序列與VP28的結(jié)合特異性；利用RNA干擾技術(shù)驗(yàn)證LvDscam與對(duì)蝦特異性吞噬WSSV的相

3、關(guān)性。具體的研究成果如下：1、利用酵母雙雜交系統(tǒng)研究Bsubtilis—VP28誘導(dǎo)形成的LvDscam變構(gòu)體庫(可變結(jié)構(gòu)域192和193)與VP28蛋白的相互作用，探究Dscam與免疫原結(jié)合的特異性。本次研究中合成了以下序列192、193原基因序列、VP28一192、VP28193特異性變構(gòu)體序列，以及新型特異性變構(gòu)體v192序列，將這些序列作為獵物基因，連接到轉(zhuǎn)錄激活結(jié)構(gòu)域pGADT7AD載體中；同時(shí)合成了VP28序列，將其作為誘餌

4、基因連接到DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域pGBKT7DNABD載體中。將兩種重組質(zhì)粒穿梭載體同時(shí)導(dǎo)入到相應(yīng)酵母菌中表達(dá)，并將雜交后的酵母菌涂于選擇性培養(yǎng)基上。最后，5組有性雜交的酵母二倍體VP28192、VP28193、VP28VP28一192、VP28VP28193、VP28v192和VP28v192劃線接種于最嚴(yán)格的四重缺陷培養(yǎng)基SD／Ade／His／Leu／Trp／X0【Gal／AbA(QDO／X／A)上，都可以長(zhǎng)出藍(lán)色的菌落，表明這5組蛋白質(zhì)