Ran在對(duì)蝦血細(xì)胞吞噬中的調(diào)節(jié)作用及酚氧化酶調(diào)控相關(guān)miRNA的篩選.pdf

1、吞噬作用在無脊椎動(dòng)物的先天性免疫過程中起著非常重要的作用，RanGTPase可以通過與myosin輕鏈蛋白的相互作用調(diào)控對(duì)蝦血細(xì)胞對(duì)WSSV病毒的吞噬過程，并防御WSSV的感染，但是關(guān)于Ran基因的表達(dá)調(diào)節(jié)還未被報(bào)道過。本論文克隆包含TATA盒的Ran GTPase的啟動(dòng)子，利用生物素-鏈霉親和素試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)Ran啟動(dòng)子可與Ran蛋白相互結(jié)合，在Drosophila S2細(xì)胞中，利用螢光素酶報(bào)告基因分析發(fā)現(xiàn)Ran GTPase與Ran啟動(dòng)子

2、結(jié)合后，螢光素酶活性降低，表明啟動(dòng)子的轉(zhuǎn)錄活性降低，導(dǎo)致Ran基因轉(zhuǎn)錄水平下調(diào)。本研究揭示Ran蛋白可結(jié)合自身啟動(dòng)子調(diào)節(jié)自身的基因轉(zhuǎn)錄，這種反饋調(diào)節(jié)機(jī)制是一種新的Ran基因轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)機(jī)制。
　　 由于Ran蛋白在對(duì)蝦免疫吞噬中的重要作用，因此本研究以Ran蛋白為靶蛋白，篩選免疫增強(qiáng)劑。采用體外測定Ran GTP酶活的方法，篩選獲得2個(gè)能有效增強(qiáng)Ran酶活的分子，分別為白介素4和溶血卵磷脂；將白介素4和溶血卵磷脂注射對(duì)蝦后測定吞噬活

3、性，結(jié)果表明這2種分子均可顯著提高對(duì)蝦血細(xì)胞吞噬活性；血細(xì)胞吞噬活性提高使得WSSV拷貝數(shù)顯著降低，進(jìn)而顯著降低對(duì)蝦因感染病毒導(dǎo)致的死亡率。本研究為對(duì)蝦病害的防治提供新的免疫增強(qiáng)劑，也為對(duì)蝦病害的防治提供新的技術(shù)手段。
　　 miRNA是一類長度約為20-25nt的非編碼單鏈小分子RNA，能夠?qū)蜻M(jìn)行轉(zhuǎn)錄后表達(dá)調(diào)控，進(jìn)而參與生長發(fā)育、細(xì)胞分化、凋亡和增殖等多種生理過程。為獲得與酚氧化酶原系統(tǒng)(ProPO)相關(guān)的miRNA，本研