微生物多酚氧化酶酶源篩選及其在茶黃素合成中的應(yīng)用.pdf

1、本文為解決茶黃素體外生物合成中的技術(shù)瓶頸，從茶黃素合成所需多酚氧化酶的酶源入手，利用微生物繁殖快、易培養(yǎng)、酶產(chǎn)量高的特點(diǎn)，通過篩選多酚氧化酶的產(chǎn)酶菌種，旨在獲得能用于發(fā)酵生產(chǎn)茶黃素的高活性多酚氧化酶。 (1)從耐酚能力、兒茶素鑒別培養(yǎng)基的菌落形態(tài)觀察、液體搖瓶發(fā)酵幾個方面對冠突散囊菌、黑曲霉、毛栓菌3個菌種進(jìn)行考察，發(fā)現(xiàn)冠突散囊菌有一定的耐酚能力，在0.2﹪兒茶素濃度培養(yǎng)平皿上生長良好，不產(chǎn)生變色圈，液體深層培養(yǎng)產(chǎn)酶能力弱；黑曲

2、霉耐酚能力較強(qiáng)，在0.1～0.4﹪的兒茶素培養(yǎng)基上生長較好，且能產(chǎn)生透明水解圈，液體深層發(fā)酵黑曲霉不產(chǎn)生多酚氧化酶；毛栓菌在0.1～0.2﹪的兒茶素培養(yǎng)皿上生長好，能產(chǎn)生黃紅色的氧化圈，液體深層發(fā)酵能產(chǎn)生多酚氧化酶，酶活力為328U/mL，所以選擇毛栓菌為產(chǎn)酶菌種，并做進(jìn)一步的產(chǎn)酶培養(yǎng)基及產(chǎn)酶培養(yǎng)條件的篩選。 (2)篩選得到毛栓菌在液體深層發(fā)酵過程中培養(yǎng)的較適培養(yǎng)基組成為：馬鈴薯2﹪，KH2PO40.3﹪，MgSO40.3﹪，V

3、B0.001﹪，CaCl20.005﹪，麩皮1﹪，酵母膏0.6﹪，酪氨酸0.001mol/L。培養(yǎng)條件以32℃，110r/min為佳，接種量宜控制在4.215×105個/ml為宜，在此條件下酶的活力較高，培養(yǎng)條件改良后，酶活力可達(dá)711U/mL，較培養(yǎng)條件改良前的(328U/mL)提高了116.8﹪。 (3)毛栓菌所產(chǎn)生的胞外多酚氧化酶較適的反應(yīng)溫度范圍在28～36℃之間，作用的最適pH值為5.2。恒溫反應(yīng)30min內(nèi)均表現(xiàn)出較