黃嘌呤氧化酶、脂氧化酶和環(huán)氧化酶抑制劑的篩選及其體外抗腫瘤活性研究.pdf

1、黃嘌呤氧化酶(XOD)、脂氧化酶(LOX)和環(huán)氧化酶(COX)與腫瘤密切相關(guān)，抑制這幾種酶對于清除自由基、減少炎癥、促進(jìn)組織修復(fù)、控制腫瘤疾病的發(fā)展具有重要意義。體內(nèi)黃嘌呤和次黃嘌呤代謝是通過黃嘌呤氧化酶催化發(fā)生反應(yīng)，生成尿酸與過氧化物自由基，這些反應(yīng)會導(dǎo)致炎癥細(xì)胞釋放細(xì)胞因子，如，白介素(IL-1、IL-6)、腫瘤壞死因子（TNF）、細(xì)胞分裂素、內(nèi)毒素、腫瘤促進(jìn)劑等，激活脂質(zhì)氧化酶和環(huán)氧化酶2合成前列素，環(huán)氧化酶(COX)是前列腺素(

2、PGs)生物合成的限速酶,與炎癥、多種腫瘤有關(guān)。這幾種酶的抑制劑對于清除自由基、減少炎癥、促進(jìn)組織修復(fù)、控制一些疾病如腫瘤的發(fā)展具有重要意義。
　　黃酮類化合物（Flavnonids）是自然界廣泛存在的一類植物次生代謝產(chǎn)物。在中草藥中普遍存在，具有廣泛的生物活性，作用比較溫和，毒副作用低的特點(diǎn)。研究結(jié)果表明，黃酮類化合物具有抗炎、抗氧化、抗癌及擴(kuò)張血管，對多種腫瘤具有預(yù)防、治療或化療增敏的作用，運(yùn)用于治療多種常見癌癥。
　　

3、目的：研究黃酮類化合物對黃嘌呤氧化酶，脂氧化酶，環(huán)氧化酶的抑制作用，篩選黃嘌呤氧化酶、脂氧化酶和環(huán)氧化酶抑制劑及其體外抗腫瘤活性。
　　方法：應(yīng)用紫外分光光度法在體外進(jìn)行分子動力學(xué)檢測30種黃酮類化合物對黃嘌呤氧化酶活性和脂氧化酶活性的抑制作用。
　　應(yīng)用RT-PCR技術(shù)，檢測不同濃度的槲皮素，芹菜素，木犀草素，穗花杉雙黃酮對肝癌細(xì)胞HepG2細(xì)胞中COX-2 mRNA表達(dá)量的影響；采用MTT法檢測丹參酮，芹菜素，香葉木素，

4、木犀草素對腫瘤細(xì)胞MCF7，PC3，MGC803生長的抑制作用；用倒置顯微鏡觀察不同濃度的芹菜素作用于 HepG2， MCF7和MGC803細(xì)胞形態(tài)變化；用Annexin V-FITC/PI雙染法，檢測芹菜素誘導(dǎo)MGC803細(xì)胞凋亡的作用。
　　結(jié)果：（1）黃嘌呤氧化酶抑制活性研究表明，當(dāng)黃酮類化合物濃度為0.1mM時(shí)，芹菜素，木犀草素，木犀草苷，陳皮苷，金絲桃苷對黃嘌呤氧化酶抑制率大于50％，具有較好的抑制黃嘌呤氧化酶活性。

5、r>　?。?）脂氧化酶抑制活性研究表明，當(dāng)黃酮類化合物濃度為0.1mM時(shí)，穗花杉雙黃酮，木樨草素，木樨草苷，獐牙菜苦苷，蘆丁對脂氧化酶抑制率大于50%，具有較好的抑制脂氧化酶活性。
　?。?）環(huán)氧化酶抑制活性研究表明，芹菜素，槲皮素，穗花杉雙黃酮，木犀草素能有效降低cox-2基因mRNA的表達(dá)，并且呈現(xiàn)良好的濃度依賴關(guān)系，提示芹菜素，槲皮素，木犀草素，穗花杉雙黃酮可能通過降低cox-2 mRNA的表達(dá)，抑制炎癥調(diào)節(jié)因子的生成。

6、r>　　（4）通過MTT法測試黃酮類化合物的抑制細(xì)胞生長作用，發(fā)現(xiàn)兒茶素，表兒茶素，葛根素和黃酮苷類化合物等，在濃度低于50μM時(shí)未檢測出明顯的抑制MCF7，PC3，MGC803等腫瘤細(xì)胞生長作用。而丹參酮，芹菜素，香葉木素，木犀草素等表現(xiàn)出較好的抑制腫瘤細(xì)胞生長作用，有明顯的濃度依賴關(guān)系。丹參酮，芹菜素對 MCF7細(xì)胞的抑制作用弱于 MGC803和PC3細(xì)胞。芹菜素在濃度為100μM時(shí)對正常細(xì)胞未檢測出明顯的細(xì)胞毒作用，說明芹菜素可能