抗TNFR1中和抗體治療急性肝衰竭的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的: 通過檢測小鼠血清腫瘤壞死因子(tumor necrosis factor-α，TNF-α、ALT、AST水平，肝組織的病理改變，肝細(xì)胞凋亡程度及肝臟腫瘤壞死因子受體1(tumor necrosis factor receptor-1，TNFR1)mRNA的表達(dá)水平的改變，研究TNF-α在小鼠急性肝衰竭發(fā)生過程中的作用，觀察抗TNFR1中和抗體對小鼠肝損傷的作用和肝細(xì)胞TNFRlmRNA表達(dá)的影響，探討抗TNFR1中和抗體用于治療

2、急性肝衰竭(Actue Hepatic Failare，AHF)的可能性。 方法: 采用雄性昆明小鼠共72只,隨機(jī)分成3組,按以下要求處理：模型組為TNF-α+D-氨基半乳糖(D-Ga1N),治療組為抗TNFR1中和抗體。+D-GaIN=TNF-α，對照組為生理鹽水。以TNF-α10μg/kg+D-GaIN 900mg/kg建立肝衰竭動物模型，給予抗TNFR1中和抗體250μg/kg進(jìn)行干預(yù)。分別于造模后4h、8h和12h處死

3、小鼠，采集血清，-20℃凍存待測TNF-α、ALT、AST，收集肝組織標(biāo)本分別于4[％]的多聚甲醛中固定和液氮中保存。分別采用全自動生化法檢測ALT和AST水平、ELISA檢測TNF-α水平法、HE染色檢查肝臟組織病理變化、脫氧核糖核昔酸轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的缺口末端標(biāo)記(TUNEL)技術(shù)檢測肝細(xì)胞的凋亡程度及RT-PCR等方法肝細(xì)胞TNFR1的表達(dá)情況。 結(jié)果: 模型組血清TNF-α及ALT、AST水平明顯高于治療組(P<0.05)，

4、且血清ALT、AST水平與TNF-α水平正相關(guān)(r<，(ALT)>0.5711, P<0.05、r<，(AST)>0.5983，P<0.05)；模型組肝組織TUNEL染色可見大量凋亡細(xì)胞，HE染色有明顯的肝細(xì)胞壞死和炎性細(xì)胞浸潤，而治療組肝細(xì)胞凋亡和壞死明顯減輕，兩者比較(P<0.05)；各試驗(yàn)組肝細(xì)胞TNFRl mRNA的表達(dá)均較對照組升高(P<0.05)，并與血清TNF-α平正相關(guān)(r=0.6899，P<0.05)，治療組TNFRl