胎肝細(xì)胞移植加alr治療急性肝衰竭

1、二、立論依據(jù)二、立論依據(jù)（包括項(xiàng)目的研究意義、國內(nèi)外研究現(xiàn)狀分析，并附主要參考文獻(xiàn)及出處）對基礎(chǔ)研究，著重結(jié)合國際科學(xué)發(fā)展趨勢，論述項(xiàng)目的科學(xué)意義；對應(yīng)用基礎(chǔ)研究，著重結(jié)合學(xué)科前沿、圍繞國民經(jīng)濟(jì)和社會發(fā)展中的重要科技問題，論述其應(yīng)用情景。重癥肝炎（又稱暴發(fā)性肝功能衰竭）發(fā)生多與肝炎病毒感染、化學(xué)藥物中毒等因素有關(guān)，我國又是病毒性肝炎發(fā)生大國，每年都有相當(dāng)一部分病人患重癥肝炎，每年僅重醫(yī)大附二院傳染科收治的重癥肝炎病人就近幾十例。重癥肝炎

2、以起病急、病情進(jìn)展快、病死率高為特點(diǎn)，目前對它的發(fā)生機(jī)制仍未搞清，因此它嚴(yán)重威脅著人們的生命健康。國內(nèi)現(xiàn)主要以綜合療法治療重癥肝炎，此療法雖對改善疾病的某些癥狀有一定幫助，但并未從根本上改變該病的預(yù)后。國外多以肝移植來治療本病，其近期療效明確而肯定，但遠(yuǎn)期療效因受免疫排斥反應(yīng)的制約而不容樂觀。近兩年國內(nèi)幾家大醫(yī)院也相繼開展了肝移植手術(shù)，但受手術(shù)復(fù)雜性、器官來源以及接受肝移植者需長期服用免疫抑制劑來避免排斥反應(yīng)發(fā)生所造成的高昂藥費(fèi)和長期使

3、用免疫抑制劑可能造成腎損害等因素的制約，仍限制了此療法的開展。人和哺乳動物的肝臟具有強(qiáng)大的再生功能，23肝切除后的動物在1015天左右殘存肝臟可恢復(fù)到術(shù)前體積，而重癥肝炎患者多表現(xiàn)為缺乏這種再生能力。究其原因除了殘存肝細(xì)胞不能為機(jī)體代謝提供足夠的肝功能支持外，激活的免疫細(xì)胞及其產(chǎn)生的炎癥因子仍不斷造成殘存肝細(xì)胞壞死，甚至殺傷新生肝細(xì)胞，從而嚴(yán)重阻礙了肝臟的再生。近年來越來越多的研究證實(shí)肝內(nèi)和浸潤的單核巨噬細(xì)胞及其產(chǎn)生的炎癥因子在造成肝細(xì)

4、胞大量壞死、殺傷新生肝細(xì)胞方面起了極其重要的作用（1，2）。如果抑制或刪除肝內(nèi)的單核巨噬細(xì)胞，或中和炎癥因子就能大大改善肝臟的再生能力（3，4，5）。在這些研究中人們多使用相應(yīng)的單克隆抗體來刪除或中和單核巨噬細(xì)胞和它們產(chǎn)生的炎癥因子。但單克隆抗體多來自小鼠雜交瘤細(xì)胞，用于人體治療受到限制。急性肝功能衰竭時如能提供一定數(shù)量的外源性肝細(xì)胞和某種能抑制肝內(nèi)單核巨噬細(xì)胞功能的物質(zhì)，起到既阻止殘存肝細(xì)胞進(jìn)一步壞死和殺傷新生肝細(xì)胞，又能避免外源性肝

5、細(xì)胞遭到排斥，同時還能支撐機(jī)體代謝需要，減輕殘存肝細(xì)胞的負(fù)擔(dān)，使它們有足夠時間再生，達(dá)到治愈肝功能衰竭的目的。眾多的動物實(shí)驗(yàn)已證明肝細(xì)胞移植加免疫抑制劑可滿足這一目的（6，7，8），但免疫抑制劑都是非特異地抑制機(jī)體的整個免疫系統(tǒng)，在降低免疫反應(yīng)的同時也降低了機(jī)體的抵抗力，常常引起嚴(yán)重的繼發(fā)感染，而且免疫抑制劑多有嚴(yán)重的毒副作用，如臨床常用的環(huán)孢霉素A就有嚴(yán)重的腎毒性，這些在重癥肝炎常是導(dǎo)致病人死亡的危險因素。1994年Hagiya從乳鼠

6、肝臟中分離出一種能促進(jìn)肝臟再生的物質(zhì)，并克隆了它的cDNA，為它取名為肝再生增強(qiáng)因子（augmenterofliverregeneration，ALR）（9）。我們已從人胎肝組織中克隆出人ALRcDNA，成功構(gòu)建了它的真、原核重組表達(dá)質(zhì)粒，并進(jìn)行了高效表達(dá)（10，11）。新近的研究發(fā)現(xiàn)ALR能通過抑制肝內(nèi)NK細(xì)胞的活性來促進(jìn)肝細(xì)胞再生（12，13）。在胎胰島細(xì)胞移植加ALR治療糖尿病大鼠的研究中也發(fā)現(xiàn)，凡在移植細(xì)胞部位加注ALR的大鼠血

7、糖都恢復(fù)到正常水平，而單獨(dú)接受胎胰細(xì)胞移植治療的大鼠無一只血糖恢復(fù)正常，說明ALR使移植的胎胰細(xì)胞避免了排斥反應(yīng)，能存活并發(fā)揮功能（14）?；谶@些最新研究成果，我們擬探討胎肝細(xì)胞移植與ALR聯(lián)合運(yùn)用治療急性肝功能衰竭的可行性及其相關(guān)機(jī)制，期望為臨床治療重癥肝炎找到確實(shí)有效，又經(jīng)濟(jì)可行的治療方法；同時探索胎肝細(xì)胞的最佳凍存、復(fù)蘇條件，評價凍存細(xì)胞作為供者細(xì)胞的可行性，為今后臨床應(yīng)用時出現(xiàn)供者細(xì)胞短缺提供解決辦法；并通過本研究觀察在急性肝

8、損傷時血和肝組織中ALR和TNFα、IL1等炎癥因子的變化關(guān)系，進(jìn)一步闡明ALR的作用機(jī)理。2NikolaLVLenzoPAlessroAetal.ChangesofliverresidentNKcellsduringliverregenerationinrats.JImmunology1995154:632463383BlazkaMEElwellMRHolladaySDetal.Histopathologyofacetaminophe

9、ninducedliverchanges:oleofinterleukin1alphatumnecrosisfactalpha.ToxicolPathol199624:1811894TamuraFMasuharaASakaidaIetal.FK506promatesliverregenerationbysuppressingnaturalkillercellactivity.JGastroenterolHepatol199813:703

10、7085BoultonRAAlisonMRGoldingMetal.Augmentationoftheearlyphaseofliverregenerationafter70%partialhepatectomyinratsfollowingivekuffercelldepletion.JHepatol199829:2712806TakeshitaKIshibashiHSuzukiMetal.Hepatocellulartranspla

11、ntationfmetabolicsupptinexperimentalacuteischemicliverfailureinrats.CellTransplant19932:3193247DemetriouAAReisnerASanchezJetal.Transplantationofmicrocarrierattachedhepatocytesinto90%partiallyhepatectomizedrats.Hepatology

12、19888:100610098MitoMSusanoMSawaMetal.Hepatocytetransplantationfhepaticfailure.TransplantRev19937:35439MichioHagiyaAntonioFrancavillaLenzoPolimenoetal.Cloningsequenceanalysisoftherataugmenterofliverregeneration(ALR)gene:E

13、xpressionofbiologicallyactiverecombinantALRdemonstrationoftissuedistribution.Proc.Natl.Acad.Sci.USA199491:8142814610.中華肝臟病雜志。19997(3)11.中華肝臟病雜志2000；8（1）12.FrancavillaAVujanovicNLPolimenoLetal.Theinvivoeffectofhepatotroph

14、icfactsaugmenterofliverregenerationhepatocytegrowthfactinsulinlikegrowthfactIIonlivernaturalkillercellfunctions.Hepatology199725:41141513.TanigawaKSakaidaIMasuharaMetal.Augmenterofliverregeneration(ALR)maypromoteliverreg

15、enerationbyreducingnaturalkiller(NK)cellactivityinhumanliverdiseases.JGastroenterol200035:11211914.AdamsGAMaestriMSquiersECetal.Augmenterofliverregenerationenhancesthesuccessratsoffetalpancreastransplantationinrodents.Tr