兔口腔黏膜上皮干細(xì)胞培養(yǎng)構(gòu)建組織工程黏膜的初步研究.pdf

1、山西醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文兔口腔黏膜上皮干細(xì)胞培養(yǎng)構(gòu)建組織工程黏膜的初步研究姓名：張嵐申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：眼科學(xué)指導(dǎo)教師：李冰20080504山西醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文目的：組織工程技術(shù)首先要獲取干細(xì)胞為種子細(xì)胞體外培養(yǎng)。獲取足量干細(xì)胞并維持其生物學(xué)特性是我們研究的重點。方法：利用Ⅳ型膠原對干細(xì)胞快速黏附特性，將口腔黏膜上皮干細(xì)胞從上皮細(xì)胞單細(xì)胞懸液初步篩選出，進行體外培養(yǎng)及生物學(xué)特性觀察，同時利用上皮干細(xì)胞相對特異標(biāo)識物P63加以鑒定

2、。結(jié)果：篩選細(xì)胞在體外呈克隆性生長：P63陽性表達(dá)，顯示所篩選細(xì)胞為上皮干細(xì)胞。本部分獲得處于良好生長狀態(tài)的口腔黏膜干細(xì)胞，為后續(xù)實驗奠定基礎(chǔ)。第三部分兔口腔黏膜上皮干細(xì)胞培養(yǎng)構(gòu)建組織工程黏膜目的：探尋兔口腔黏膜上皮干細(xì)胞培養(yǎng)構(gòu)建組織工程黏膜的方法。方法：用本實驗設(shè)計的組織工程黏膜培養(yǎng)系統(tǒng)，以口腔黏膜上皮干細(xì)胞為種子細(xì)胞，以去上皮羊膜為支架，體外構(gòu)建組織工程上皮膜片，同時以兔角膜上皮為對照組。常規(guī)HE染色和透射電鏡觀察上皮膜片的形態(tài)和細(xì)

3、胞結(jié)構(gòu)，并同時檢測上皮膜片細(xì)胞K3(上皮角化特異標(biāo)識物)和P63(上皮干細(xì)胞相對特異性標(biāo)識物)的表達(dá)。結(jié)果：口腔黏膜上皮干細(xì)胞可以在去上皮羊膜上形成無角化的類角膜上皮結(jié)構(gòu)，并且底層存在上皮干細(xì)胞，超微結(jié)構(gòu)符合上皮組織特點，表明口腔黏膜上皮干細(xì)胞可以在體外成功構(gòu)建組織工程上皮膜片，同時仍保留一定的上皮干細(xì)胞，有利于損傷部位結(jié)構(gòu)及功能的修復(fù)。綜上所述，我們以去上皮羊膜為載體，用DefinedKSFM做培養(yǎng)液，采用氣液界面培養(yǎng)方式，培養(yǎng)獲得的