絲素蛋白支架構(gòu)建組織工程化口腔黏膜固有層修復(fù)頰粘膜缺損的實驗研究.pdf

1、目的：
　　 探討應(yīng)用絲素蛋白支架材料構(gòu)建組織工程化口腔黏膜固有層修復(fù)頰粘膜缺損的可行性。
　　 方法：
　　 1、采用勻漿法分離成單細胞懸液再貼壁培養(yǎng)的方法培養(yǎng)大鼠口腔黏膜成纖維細胞，傳代至第3代細胞時行波形蛋白鑒定，熒光染料染色后接種到孔徑為265μm的多孔絲素蛋白支架材料上，24小時檢測細胞粘附率；分別對培養(yǎng)1、4、7天行激光掃描共聚焦顯微鏡觀察細胞粘附增殖情況；4、7天行細胞支架復(fù)合物行掃描電鏡觀察。

2、r>　　 2、雄性SD清潔級大鼠48只，隨機分為3組。A組：實驗組即口腔黏膜固有層組，n=16，以絲素蛋白支架構(gòu)建的口腔黏膜固有層修復(fù)大鼠口腔頰黏膜圓形缺損(直徑10咖)；B組：陰性對照組即絲素蛋白支架組，n=16，以絲素蛋白支架組修復(fù)大鼠口腔頰粘膜圓形缺損(直徑10mm)；C組：空白對照組，n=16，以凡士林油紗覆蓋大鼠口腔頰粘膜圓形缺損(直徑10mm)。術(shù)后7、14、21及28天分別行大體觀察、創(chuàng)面直徑測量、組織學(xué)、免疫組織化學(xué)檢

3、測。
　　 結(jié)果：
　　 1、大鼠口腔黏膜成纖維細胞培養(yǎng)：①光鏡下觀察細胞形態(tài)大多數(shù)完整、分散度好及細胞增殖快，波形蛋白檢測三代細胞時陽性率為99％。細胞材料復(fù)合培養(yǎng)24小時后細胞粘附率為(97.76±1.34)％。②激光共聚焦顯微鏡觀察第1天細胞呈圓形或橢圓形沿著支架及孔的邊緣呈現(xiàn)散在的、單一的分布；第4天支架上細胞數(shù)量顯著增多，細胞融合、粘附。第7天支架及孔徑內(nèi)部細胞呈團簇狀、片狀生長，呈現(xiàn)長梭形、橢圓形細胞覆蓋了材

4、料的大部分。⑨掃描電鏡觀察第1、4天大鼠口腔黏膜成纖維細胞呈梭形或多角形在材料上粘附伸展；第7天細胞表面有細小絨毛和褶皺形成，與接觸部位伸偽足形成，呈(鴨蹼)狀粘附和包繞纖維并可見細胞分泌的基質(zhì)沉積于細胞周圍和表面，細胞數(shù)量增多，細胞在支架材料上生長旺盛。
　　 2、創(chuàng)面觀察：①創(chuàng)面大體觀察：術(shù)后3組創(chuàng)面直徑收縮率為C組>B組>A組，其中A組及B組創(chuàng)面呈現(xiàn)逐漸收縮，C組呈現(xiàn)先慢后快的收縮。術(shù)后7天A組及B組創(chuàng)面均被黃色薄膜覆蓋，

5、C組創(chuàng)面被淺黃色偽黏膜覆蓋。②組織學(xué)顯示：HE染色示術(shù)后C組在各個時間點創(chuàng)面炎性細胞密度及數(shù)量均大于A組及B組。③免疫組化顯示：術(shù)后7天三組新生黏膜廣譜角蛋白(cytokeration，CK)表達均陽性。A組可見上皮層數(shù)明顯多于B、C兩組，C組最少，釘突粗大。A、B組新生上皮與正?？谇火つは嗨?，上皮化程度方面A組明顯優(yōu)于B組；C組口腔黏膜上皮厚薄不一，上皮下炎性細胞多。CD31染色顯示：術(shù)后A組在各個時間點新生毛細血管數(shù)量最多，且分布均