變鏈菌F-ATP酶β亞基基因的克隆與F-ATP酶活性分析.pdf

1、目的：變形鏈球菌(Streptococcusmutans，簡稱變鏈菌)是構(gòu)成牙菌斑的重要成分，也是形成齲病的重要致病菌之一。對于變鏈菌來說，F(xiàn)-ATP酶與其耐酸性及致齲性密切相關(guān)。本研究克隆及分析變鏈菌F-ATP酶的β亞基基因，目的是從分子基因的角度進(jìn)一步探尋變鏈菌F-ATP酶對其耐酸性和致齲性的作用；另外，構(gòu)建含變鏈菌質(zhì)子移位ATP酶基因的重組質(zhì)粒，可為進(jìn)一步轉(zhuǎn)化變鏈菌，通過同源重組構(gòu)建變鏈菌基因缺陷株奠定基礎(chǔ)。總之，研究F-ATP酶

2、等致齲相關(guān)酶能夠?yàn)辇x病的預(yù)防和治療開辟新途徑。 方法：本實(shí)驗(yàn)首先在厭氧條件下培養(yǎng)變鏈菌，提取變鏈菌基因組DNA，再采用PCR方法，以變鏈菌基因組DNA為模板擴(kuò)增F-ATP酶β亞基5′末端序列，將克隆片段與載體pVA891酶切后連接，形成重組質(zhì)粒；將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌，對轉(zhuǎn)化后大腸桿菌和未轉(zhuǎn)化大腸桿菌的F-ATP酶活性進(jìn)行比較和分析；嘗試將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化變鏈菌，對變鏈菌標(biāo)準(zhǔn)株和耐氟株的轉(zhuǎn)化能力作一初步的分析。 結(jié)果：構(gòu)建的

3、重組質(zhì)粒經(jīng)PCR、酶切電泳及測序鑒定顯示序列正確；變鏈菌F-ATP酶β亞基基因的克隆片段通過構(gòu)建重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化進(jìn)入大腸桿菌，F(xiàn)-ATP酶活性分析顯示轉(zhuǎn)化后大腸桿菌的F-ATP酶活性與未轉(zhuǎn)化的親代菌株比較具有差異；初步分析變鏈菌標(biāo)準(zhǔn)株和耐氟株的對質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化能力，顯示耐氟株的轉(zhuǎn)化能力高于標(biāo)準(zhǔn)株。 結(jié)論：本實(shí)驗(yàn)通過對變鏈菌F-ATP酶β亞基部分基因的克隆及對含目的基因的大腸桿菌進(jìn)行F-ATP酶活性分析，顯示出變鏈菌F-ATP酶β亞基基因