高粱ATP合成酶E亞基編碼基因(SbATPase-E)的克隆及其抗逆功能研究.pdf

1、干旱嚴(yán)重的影響了作物的生長和產(chǎn)量。利用基因工程的手段提高作物的抗旱性成為作物育種中的一個(gè)重要途徑。其中，獲得有價(jià)值的目標(biāo)基因成為這一途徑的瓶頸。因此，快速高效的挖掘抗旱基因在作物育種中有著重要的意義。
　　全長cDNA過表達(dá)系統(tǒng)[FOX(Full-length cDNA over-expressing gene)hunting system]只需要知道全長cDNA就可以解析基因功能。本實(shí)驗(yàn)在前期構(gòu)建的高粱全長cDNA文庫中篩選抗旱

2、相關(guān)基因。對(duì)其中的一個(gè)SbATPase-E基因進(jìn)行了詳細(xì)的功能鑒定。主要的實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下:
　　(1)利用FOX全長cDNA過表達(dá)系統(tǒng)篩選高粱抗旱相關(guān)基因
　　實(shí)驗(yàn)室前期構(gòu)建高粱FOX擬南芥庫，對(duì)轉(zhuǎn)基因擬南芥T1代進(jìn)行干旱處理，收獲存活單株。T3代表型鑒定及分子水平鑒定，得到7個(gè)與抗旱相關(guān)的基因。
　　(2)SbA TPase-E基因抗逆相關(guān)功能研究
　　從篩選到的7個(gè)抗旱相關(guān)基因中選擇SbATPase-E基因進(jìn)行

3、詳細(xì)的功能研究。發(fā)現(xiàn)該基因提高了轉(zhuǎn)基因擬南芥的耐旱性和耐鹽性。為了進(jìn)一步研究該基因的功能，對(duì)過表達(dá)轉(zhuǎn)基因擬南芥的耐旱性、耐鹽性、種子萌發(fā)率以及抗逆性相關(guān)基因進(jìn)行了鑒定。NaCl和ABA處理的過表達(dá)轉(zhuǎn)基因擬南芥種子萌發(fā)率顯著提高。甘露醇、氯化鈉處理下轉(zhuǎn)基因擬南芥根部相對(duì)于野生型發(fā)達(dá)。逆境條件下轉(zhuǎn)基因擬南芥植株較野生型植株根系發(fā)達(dá)很可能是轉(zhuǎn)基因植株較野生型植株耐旱性和耐鹽性提高的主要原因。NaCl和ABA處理下的高粱幼苗相對(duì)于正常生長條件下