F1F0-ATP(合成)酶在角質(zhì)形成細胞分化過程中的表達及其功能研究.pdf

1、目的：
　　 F1F0-ATP（合成）酶是一種廣泛分布于各種組織細胞內(nèi)的酶復合體，是線粒體氧化磷酸化體系的重要組成部分，主要在細胞內(nèi)或細胞膜發(fā)揮合成或水解ATP的功能。本研究著眼于F1F0-ATP(合成)酶在角質(zhì)形成細胞分化過程中表達的變化，及其可能發(fā)揮的作用。為進一步研究角質(zhì)形成細胞分化與細胞內(nèi)外ATP水平及能量代謝的關系奠定基礎。
　　 方法：
　　 1、采用免疫組化方法檢測和比較分析了正常皮膚、銀屑病、角化

2、棘皮瘤、皮膚鱗癌皮損中F1F0-ATP（合成）酶β亞基(ATP5B)的表達模式;
　　 2、在建立體外培養(yǎng)密度依賴的HaCaT細胞分化模型基礎上，用免疫印跡、免疫熒光和RT-PCR的方法檢測F1F0-ATP（合成）酶β亞基(ATP5B)表達的變化;
　　 3、應用ATP熒光定量檢測方法檢測了F1F0-ATP（合成）酶小分子抑制劑——寡霉素和白皮杉醇，對于HaCaT細胞內(nèi)外ATP水平的影響，并用免疫印跡方法檢測了其對于Ha

3、CaT細胞分化標志(involucrin)的影響。
　　 結(jié)果：
　　 1、在正常皮膚、銀屑病皮損和角化棘皮瘤中，ATP5B隨表皮分化而表達增高;在銀屑病皮損和角化棘皮瘤中ATP5B較正常皮膚表達下降;鱗癌癌灶中ATP5B較周邊相對正常皮膚表達下降;
　　 2、建立了體外培養(yǎng)的密度依賴的HaCaT細胞分化模型，在mRNA水平和蛋白水平驗證了分化指標的表達隨培養(yǎng)時間延長而增加;
　　 3、在密度依賴的HaC

4、aT分化模型中，ATP5B在mRNA水平上，第6d和第8d可見顯著上調(diào)(p＜0.05)，在蛋白水平上未見明顯改變(p＞0.05);
　　 4、常規(guī)培養(yǎng)狀態(tài)下，寡霉素可降低HaCaT細胞內(nèi)ATP的水平和involucrin蛋白表達水平;白皮杉醇主要降低HaCaT細胞外ATP的水平，對胞內(nèi)ATP水平和involucrin蛋白表達水平無明顯抑制作用;
　　 5、在密度依賴的分化模型中，白皮杉醇可顯著降低分化模型后期細胞內(nèi)ATP