mMARVEL D1在ES細胞分化中的表達及其對EBs形成的影響.pdf

1、胚胎干細胞(embryonicstem cell)是一類具有多向分化潛能的細胞,在離體環(huán)境下可被誘導為幾乎所有的生物體組織和器官。因此,胚胎干細胞(ES細胞)也成為研究生物體發(fā)育與遺傳操作的理想材料。已知,ES細胞在去LIF培養(yǎng)基的培養(yǎng)條件下可自發(fā)分化形成球狀結(jié)構(gòu)的擬胚體,而其可在一定程度上表現(xiàn)出生物體發(fā)育早期階段的胚胎學特征,因此,擬胚體的獲得與研究也就成為了研究生物發(fā)育重要手段。
　　本課題為深入認識MARVEL D1基因的功

2、能,研究主要包括兩部分內(nèi)容,分別是鼠源MARVELD1基因(mMARVELD1)在ES細胞和ES細胞向擬胚體分化形成過程中的表達變化及分析該基因?qū)M胚體形成的影響。此項研究為探討mMARVELD1基因在胚胎發(fā)育過程中的生物學作用奠定了重要基礎(chǔ)。
　　本文首先探討了ES細胞及ES細胞向擬胚體分化形成過程中mMARVELD1基因的表達變化,實驗采用小鼠胚胎干細胞ESR1系為實驗材料,并采用去LIF培養(yǎng)基培養(yǎng)ES細胞向擬胚體(Embry

3、oid Bodies,EBs)的分化形成,并檢測ES細胞向擬胚體分化形成過程mMARVELD1蛋白的表達變化,并進一步分析了該基因在生物體發(fā)育早期器官形成過程中可能具有的重要作用。研究發(fā)現(xiàn),mMARVELD1基因在ES細胞中低表達,并且隨著ES細胞的分化,該基因表達量總體上呈增加趨勢,尤其在ES細胞向擬胚體形成第8d時,該基因的表達量達到最高水平,表明該基因可能參與ES細胞的分化及其及其向擬胚體的形成過程。
　　隨后,為研究mMA

4、RVELD1基因?qū)S細胞向擬胚體分化形成的過程中的影響,研究又進一步運用RNA干擾技術(shù)對該基因進行沉默,觀察mMARVELD1基因低表達的ES細胞向擬胚體形成過程中表現(xiàn)出的形態(tài)學差異。結(jié)果發(fā)現(xiàn),該基因能夠促進ES細胞向擬胚體的分化形成過程。與此同時,研究又進一步運用分子克隆技術(shù)與方法成功構(gòu)建了mMARVELD1基因的敲除載體,并以該載體為實驗材料對ESR1細胞電轉(zhuǎn)條件進行摸索,以期獲得mMARVELD1基因缺失型的ES細胞克隆,為深入