幾種黃酮類藥物小分子與牛血清白蛋白相互作用的研究.pdf

1、黃酮類化合物是廣泛存在于自然界中的一類天然活性物質(zhì),對多種疾病具有良好的療效。研究黃酮類藥物小分子與血清白蛋白生物大分子的結(jié)合,對于藥物代謝動力學、生物化學、制藥學和臨床醫(yī)學具有重要的參考價值,能為其提供重要的生理參數(shù)和藥物指標。本文選取牛血清白蛋白(Bovine serum albumin,BSA)為模型蛋白質(zhì),應(yīng)用熒光光譜、紫外吸收光譜等方法對BSA與8種不同結(jié)構(gòu)的黃酮類藥物槲皮素(Quercetin,QU)、楊梅素(Myricet

2、in,MY)、二氫槲皮素(Dihydroquercetin,DOU)、二氫楊梅素(Dihydromyricetin,DMY)、表兒茶素沒食子酸酯(Epicatechin gallate,ECG)、表沒食子兒茶素沒食子酸酯(Epigallocatechin gallate,EGCG)、表沒食子兒茶素(Eoigallocatechin EGC)及沒食子兒茶素(Gallocatechin GC)相互作用的機理進行了研究。主要研究內(nèi)容如下:

3、r>　　 (1)采用熒光發(fā)射光譜、紫外光譜、同步熒光光譜等技術(shù)研究了模擬生理條件下二氫楊梅素與牛血清白蛋白的相互作用及金屬離子對結(jié)合的影響。實驗結(jié)果表明,二氫楊梅素通過靜態(tài)猝滅機理猝滅了牛血清白蛋白的內(nèi)源熒光。并計算了15℃、25℃和37℃三個不同溫度下二氫楊梅素與牛血清白蛋白相互作用的猝滅常數(shù)Ksv、結(jié)合常數(shù)Ka及結(jié)合位點數(shù)n；分析了二氫楊梅素對牛血清白蛋白二級結(jié)構(gòu)的影響,并根據(jù)熱力學參數(shù)推斷了作用力本質(zhì)主要是疏水作用和靜電作用；通

4、過熒光光譜和紫外吸收光譜的重疊光譜可以得到分子間結(jié)合的空間距離為3.43 nm；Co2+、Cu2+、Ni2+和K+的存在均增加了DMY-BSA體系的結(jié)合常數(shù),尤其是Cu2+的存在可使結(jié)合常數(shù)增大兩個數(shù)量級。
　　 (2)利用熒光光譜研究了模擬生理條件下槲皮素、楊梅素以及它們對應(yīng)的氫化物二氫槲皮素、二氫楊梅素這四種結(jié)構(gòu)相似的黃酮醇藥物分子與牛血清白蛋白的結(jié)合情況,探討了黃酮醇藥物分子C環(huán)氫化及B環(huán)羥基數(shù)目對其與BSA相互作用的影響

5、。實驗結(jié)果表明,除二氫槲皮素外,其他三種黃酮醇均能顯著猝滅牛血清白蛋白的內(nèi)源熒光,結(jié)合常數(shù)分別為1.84×108(MY)、3.82×107(QU)和1.36×104L.mol-1(DMY)。這說明具有相同A環(huán)和B環(huán)結(jié)構(gòu)的黃酮醇,其C環(huán)氫化后將削弱其與BSA的作用,導致結(jié)合常數(shù)降低4個數(shù)量級；具有相同A環(huán)和C環(huán)結(jié)構(gòu)的黃酮醇,B環(huán)上羥基數(shù)目的增加將增強其與BSA的作用,且增加一個羥基可以提高結(jié)合常數(shù)1個數(shù)量級。
　　 (3)選取兒茶

6、素中具有代表性的表兒茶素沒食子酸酯(ECG)作為研究對象,利用熒光光譜法研究模擬生理pH條件下三種不同溫度(17℃,27℃,37℃)及四種不同金屬離子(Co2+,Zn2+,Cu2+,Ni2+)對其與BSA結(jié)合的影響。實驗結(jié)果表明,金屬離子的存在并未改變猝滅類型,但增強了ECG對BSA的熒光猝滅效應(yīng),且使結(jié)合過程中的主要作用力由疏水作用力變?yōu)殪o電作用力；Ni2+、Cu2+增加了ECG.BSA復(fù)合物的結(jié)合常數(shù),而Co2+、Zn2+降低了EC