多酚與人血清白蛋白相互作用研究.pdf

1、人血清白蛋白(Human serum albumin, HSA)是體內含量最豐富的運輸?shù)鞍踪|，它有許多重要的生理學和藥理學功能，能與體內的許多內源性小分子和外源性小分子等結合，并對這些分子起到存儲和轉運的作用，進而將這些分子運輸?shù)绞荏w部位，并發(fā)揮藥效。這一特點使HSA成為研究最廣泛的模式蛋白之一。多酚類小分子是廣泛存在于高等植物中且具有潛在生物活性的一類化合物，大多數(shù)的多酚是植物次級代謝產(chǎn)物。它能與人血清白蛋白相互作用后會形成一種超分子

2、復合物。在結合過程中會涉及多酚與人血清白蛋白的結合率高低問題，以及與蛋白的結合力強弱問題，這些都會影響多酚在體內生物活性的發(fā)揮。研究清楚二者之間的結合規(guī)律不僅可以為營養(yǎng)學和臨床醫(yī)學提供重要的參考數(shù)據(jù)，還對了解多酚在體內的代謝過程，闡明多酚與載體蛋白的作用機制，研究多酚的代謝動力學以及其毒理性質也有重要幫助。同時，對解釋蛋白質結構和功能的關系和開發(fā)新藥等都具有重要的生物學和生理學意義。
　　目前，小分子與生物大分子相互作用的研究越來

3、越受到學者的關注，研究方法也越來越豐富，研究領域也逐漸拓展，但研究中存在的問題是研究方法比較單一，關注的也是小分子與大分子相互作用的共性問題。很少有文獻考慮到小分子與蛋白相互作用過程中的血漿蛋白結合（Plasma protein binding, PPB）率和引起蛋白結合率差異的因素等問題；而且也很少有文獻提到二者相互結合作用過程中的結合力與蛋白結合率之間存在怎樣的關系。
　　因此，本論文基于開展小分子與載體蛋白相互作用的重要意義

4、及國內外研究趨勢，在前人工作的基礎上，綜合利用高效親和色譜法（High performance affinity chromatography, HPAC）和熒光光譜法（Fluorescence spectra, FS）從以下幾個方面進行了多酚與人血清白蛋白的相互作用研究：
　　1、利用高效親和色譜法研究了在接近生理條件下具有結構差異的多酚與HSA的相互作用，利用色譜理論計算出各物質與HSA的相對結合率，并分析了多酚結構—結合率的

5、關系以及引起結合率高低差異的因素。
　　2、利用熒光光譜法研究了多酚與HSA結合的緊密情況，根據(jù)猝滅方程計算出各物質與HSA的結合常數(shù)與結合位點。分析了引起人血清白蛋白熒光發(fā)射光譜發(fā)生紅移以及藍移的原因。以及引起多酚與HSA相互作用的主要作用力，多酚結構—結合力之間的關系等問題。
　　3、綜合高效親和色譜法與熒光光譜法的結果，探討分析了多酚與HSA的結合率以及結合力之間的關系。
　　本論文共分為四部分：
　　第一

6、章：主要綜述了小分子多酚的結構，分類及應用；介紹了人血清白蛋白的性質，結構，功能；研究小分子與大分子相互作用的常用方法以及小分子與生物大分子相互作用的研究現(xiàn)狀。
　　第二章：多酚類化合物與HSA的結合率關系研究。高效親和色譜法實驗結果表明，各多酚的色譜保留值可以作為定性分析的依據(jù)；多酚與HSA有明顯的結合作用，且各多酚與HSA的結合率有差異；多酚母環(huán)上的不同基團對其與HSA的結合率有明顯的影響作用；其中，甲基化作用降低多酚與HSA

7、的蛋白結合率，一般A環(huán)羥基化增加多酚與HSA的蛋白結合率，而B環(huán)羥基化則減弱這種作用， C2=C3碳碳雙鍵的氫化作用以及糖基化作用使多酚的蛋白結合率降低。
　　第三章：多酚類化合物與HSA的結合力關系研究。熒光實驗結果表明，多酚對HSA的熒光光譜有明顯的猝滅作用，且HSA最大熒光發(fā)射伴隨有一定的紅移或藍移現(xiàn)象；不同結構的多酚對人血清白蛋白內在熒光猝滅的程度也不同，熒光猝滅效果隨著多酚濃度的增加而增強。其中，甲基化作用增強多酚與HS