脂肪因子VASPIN血清水平、表達(dá)調(diào)控及功能研究.pdf

1、近年研究表明,脂肪組織不僅僅是一個能量儲存器官,也是一個重要的內(nèi)分泌器官,可分泌多種細(xì)胞因子,包括瘦素、抵抗素、脂聯(lián)素、內(nèi)脂素、腫瘤壞死因子、纖溶酶原激活物抑制因子和白介素-6等。新發(fā)現(xiàn)的脂肪因子正在不斷被報道。脂肪因子的發(fā)現(xiàn)使得脂肪組織已由過去單純作為能量儲存的器官成為一個極其重要的內(nèi)分泌系統(tǒng)。脂肪因子的表達(dá)或功能紊亂參與肥胖、胰島素抵抗、糖尿病及動脈粥樣硬化等多種代謝性疾病的發(fā)生發(fā)展過程。
　　 內(nèi)臟脂肪聚集是腹型肥胖的重要

2、特征。與皮下脂肪組織相比,內(nèi)臟脂肪組織具有更活躍的內(nèi)分泌功能,其分泌的脂肪因子直接影響胰島素敏感性,損傷內(nèi)皮細(xì)胞功能,參與炎癥反應(yīng)及纖溶活動,與胰島素抵抗、2型糖尿病及心血管疾病密切相關(guān)。因此深入研究內(nèi)臟脂肪因子的功能及調(diào)控有助于揭示肥胖及相關(guān)代謝異常的發(fā)生機(jī)制,為代謝性疾病的診斷和治療提供新的靶點。
　　 腹腔脂肪型絲氨酸蛋白酶抑制劑是新發(fā)現(xiàn)的一種內(nèi)臟脂肪因子,由腹腔脂肪組織合成和分泌,屬于絲氨酸蛋白酶抑制劑超家族,研究顯示該

3、蛋白具有增加胰島素敏感性,調(diào)節(jié)脂代謝,參與體內(nèi)炎癥反應(yīng)等多種生物學(xué)活性,是代謝綜合征治療的新靶點。盡管目前研究表明Vaspin水平變化可能是代謝紊亂性疾病病情變化的敏感指標(biāo),但研究結(jié)果仍存在爭議,肥胖和2型糖尿病患者血清Vaspin水平變化及影響因素尚不清楚,其變化與糖尿病大血管并發(fā)癥的發(fā)生發(fā)展的關(guān)系及脂肪細(xì)胞Vaspin表達(dá)調(diào)控的分子機(jī)制有待于進(jìn)一步研究。因此本課題主要研究血清Vaspin水平與2型糖尿病及其并發(fā)癥的關(guān)系,并初步探討脂

4、肪細(xì)胞Vaspin表達(dá)調(diào)控的影響因素及其潛在生理功能,從而為肥胖及相關(guān)代謝性疾病提供新的分子機(jī)制,為代謝綜合征的治療干預(yù)奠定理論基礎(chǔ)。
　　 第一部分血清vASPIN水平與2型糖尿病患者頸動脈粥樣硬化的關(guān)系研究
　　 目的:
　　 應(yīng)用ELISA方法檢測2型糖尿病患者血清vaspin水平,探討:(1)血清vaspin水平與2型糖尿病合并早期頸動脈粥樣硬化的關(guān)系。(2)血清vaspin水平與空腹血糖、餐后2h血糖、

5、糖化血紅蛋白、血脂及胰島素抵抗等代謝因素的關(guān)系。
　　 方法:
　　 1.病例選擇選擇2007年1月至2009年8月3日自愿參加山東大學(xué)齊魯醫(yī)院內(nèi)分泌科“2型糖尿病大血管并發(fā)癥干預(yù)措施與控制模式研究”項目的2型糖尿病患者61例,根據(jù)有無頸動脈斑塊分為糖尿病非斑塊和糖尿病合并斑塊組,另外選擇年齡、性別相匹配的健康查體者為對照組。
　　 2.標(biāo)本留取所有研究對象均進(jìn)行人體測量,體格檢查及頸動脈超聲檢查?？崭?2h后次

6、晨抽取抗凝血3ml用于HbA1c等測定,同時抽取自凝血5ml,分離血清用于生化指標(biāo)及vaspin水平的測定。
　　 3.血清vaspin水平的測定采用ELISA方法測定血清vaspin水平。
　　 結(jié)果:
　　 校正年齡、性別后,T2DM非斑塊組的血清vaspin水平顯著高于對照組,而T2DM斑塊組血清vaspin水平低于非斑塊組。在對所有入選者進(jìn)行的簡單相關(guān)分析中,調(diào)整年齡、性別及體質(zhì)指數(shù)后偏相關(guān)分析,血清va

7、spin與腰圍呈正相關(guān),與胰島素抵抗指數(shù)負(fù)相關(guān)。糖尿病患者的相關(guān)分析表明,vaspin水平與WC正相關(guān),與HOMA-IR和低密度脂蛋白負(fù)相關(guān)。以糖尿病組為整體,行Logistic回歸分析,結(jié)果顯示收縮壓和Vaspin水平影響糖尿病合并頸動脈硬化的發(fā)生,提示血清Vaspin水平下降可能是2型糖尿病動脈粥樣硬化早期發(fā)生的標(biāo)志物。
　　 結(jié)論:血清vaspin水平可能參與胰島素抵抗和糖尿病的發(fā)生,在以胰島素抵抗為特征的代謝綜合征的發(fā)病

8、中發(fā)揮重要作用。同時血清Vaspin水平下降可能是2型糖尿病動脈粥樣硬化早期發(fā)生的標(biāo)志物,盡早檢測血清Vaspin水平,可以預(yù)測糖尿病動脈粥樣硬化等大血管并發(fā)癥的發(fā)生與發(fā)展。
　　 第二部分
　　 血清VASPIN水平與2型糖尿病視網(wǎng)膜病變的關(guān)系研究
　　 目的:
　　 應(yīng)用ELISA方法檢測2型糖尿病患者血清vaspin水平,探討:(1)血清vaspin水平與2型糖尿病視網(wǎng)膜病變及其嚴(yán)重程度的關(guān)系。(2

9、)血清vaspin水平與年齡、病程、FPG、2HPG、HbA1c、血脂、尿白蛋白排泄率(UAER)及其它脂肪因子的關(guān)系。
　　 方法:
　　 1.病例選擇選擇2009年2月至2009年6月間山東大學(xué)齊魯醫(yī)院內(nèi)分泌科門診和住院的2型糖尿病患者94例,根據(jù)有無視網(wǎng)膜病變及嚴(yán)重程度,分為無視網(wǎng)膜病變組、單純型糖尿病視網(wǎng)膜病變組(38例)和增殖型糖尿病視網(wǎng)膜病變組。
　　 2.標(biāo)本留取所有對象均進(jìn)行人體測量及體格檢查。所

10、有個體空腹12h后次晨抽靜脈血,進(jìn)行生化指標(biāo)的測定。采取靜脈血,分離血清后-80℃保存,集中測定血清vaspin和視黃醇結(jié)合蛋白4水平。
　　 3.血清vaspin和RBP4水平的測定采用ELISA方法測定血清vaspin和RBP4水平。
　　 結(jié)果:
　　 在糖尿病患者中,調(diào)整年齡和病程后,單純性視網(wǎng)膜病變的患者vaspin血清水平顯著低于無視網(wǎng)膜病變患者,有增殖性視網(wǎng)膜病變的患者vaspin血清水平較無視網(wǎng)膜

11、病變患者更低,增殖性視網(wǎng)膜病變患者vaspin血清水平低于單純性視網(wǎng)膜患者,但無顯著性。簡單相關(guān)分析示血清vaspin與年齡、病程、UAER及RBP4呈負(fù)相關(guān)。偏相關(guān)分析顯示控制年齡和BMI后,vaspin與UAER的相關(guān)性仍然存在。多元逐步回歸分析表明年齡、UAER是血清vaspin水平的獨立影響因素。
　　 結(jié)論:
　　 2型糖尿病患者血清vaspin水平與年齡、UAER呈明顯相關(guān)。血清Vaspin水平在2型糖尿病視

12、網(wǎng)膜病變,尤其是合并增殖性視網(wǎng)膜病變者中顯著降低,提示血清vaspin水平與糖尿病視網(wǎng)膜病變有關(guān),可能影響糖尿病微血管病變的發(fā)生發(fā)展。
　　 第三部分3T3-L1脂肪細(xì)胞VASPIN表達(dá)的影響因素研究
　　 目的:
　　 Vaspin作為一種新發(fā)現(xiàn)的具有胰島素增敏作用的脂肪因子,主要由內(nèi)臟脂肪組織分泌。但是參與調(diào)節(jié)vaspin表達(dá)的因素尚未完全清楚。本研究旨在探討3T3-L1脂肪細(xì)胞分化過程中vaspin表達(dá)的變

13、化,并研究在不同代謝因素下vaspin表達(dá)的調(diào)節(jié)機(jī)制及影響因素。
　　 方法:
　　 1.體外培養(yǎng)3T3-L1脂肪前體細(xì)胞并誘導(dǎo)分化為成熟脂肪細(xì)胞,分別于85％融合、融合、融合后2天、5天、8天、10天提取細(xì)胞總RNA。用RT-PCR方法檢測vaspin mRNA的表達(dá),ELISA檢測細(xì)胞上清液vaspin水平。
　　 2.分別以不同濃度地塞米松、胰島素、葡萄糖、棕櫚酸、TNF-α、吡格列酮、非諾貝特和硫辛酸干預(yù)

14、分化成熟的3T3-L1細(xì)胞24h,留取細(xì)胞上清液,提取細(xì)胞總RNA,RT-PCR檢測vaspin mRNA的表達(dá)水平。
　　 3.以對照組、TNF-α組、TNF-α+吡格列酮、和TNF-α+吡格列酮,分別培養(yǎng)48h,留取細(xì)胞上清液,收集脂肪細(xì)胞,提取總RNA,用RT-PCR檢測vaspin mRNA的表達(dá)；以對照組、TNF-α組、TNF-α+非諾貝特、和TNF-α+非諾貝特,分別培養(yǎng)48h,留取細(xì)胞上清液,收集脂肪細(xì)胞,提取總R

15、NA并測定vaspin mRNA的表達(dá)；以對照組、TNF-α組、TNF-α+硫辛酸、和TNF-α+硫辛酸,分別培養(yǎng)48h,留取細(xì)胞上清液,收集脂肪細(xì)胞,提取總RNA并測定vaspin mRNA的表達(dá)。
　　 結(jié)果:
　　 在3T3-L1脂肪前體細(xì)胞分化過程中,vaspin mRNA表達(dá)明顯增加并呈時間依賴性。在80％融合到融合后兩天,vaspin表達(dá)增加到起始的1.7倍。至分化后第8天增加至起始6倍。地塞米松(100μM

16、,1.6倍),高糖(25mM,6.6倍),吡格列酮(100μM,1.6倍)、非諾貝特(100μM,1.5倍)和硫辛酸(500μM,1.6倍)能顯著誘導(dǎo)3T3-L1脂肪細(xì)胞中vaspin mRNA的表達(dá)。而其它處理因素10-100nM胰島素,1mM棕櫚酸,10-20 ng/ml TNF-α則對其mRNA表達(dá)有下調(diào)作用,較基線值分別下降(37-53)％,48％和(15-40)％。同時吡格列酮和硫辛酸可逆轉(zhuǎn)TNF-α所致的vaspin mRN

17、A表達(dá)的降低。
　　 同時在3T3-L1脂肪細(xì)胞誘導(dǎo)分化中,vaspin蛋白分泌亦逐漸增加,并呈時間依賴性。開始后的前5天vaspin蛋白水平增加迅速,6天以后增加明顯變慢。地塞米松、葡萄糖顯著增加vaspin的分泌,胰島素、TNF-α明顯降低vaspin的分泌,而棕櫚酸無明顯影響。吡格列酮和硫辛酸明顯改善TNF-α所致的vaspin分泌的降低。
　　 結(jié)論:在脂肪細(xì)胞分化過程中vaspin表達(dá)水平與細(xì)胞分化程度明顯相關(guān)