芍藥苷抑制HMGB1釋放對(duì)肝組織炎癥和纖維化的保護(hù)作用.pdf

1、研究背景：
　　 肝纖維化是肝損傷的一種修復(fù)反應(yīng)也是一個(gè)可逆性的病理過(guò)程，而肝硬化是難以逆轉(zhuǎn)的病理改變。所以現(xiàn)在研究延緩肝纖維化的發(fā)生已成為一個(gè)熱點(diǎn)。通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和我們先前的細(xì)胞實(shí)驗(yàn)初步證明了芍藥苷(paeoniflorin Pae)通過(guò)抑制了包括HMGB1、TNF-α等在內(nèi)的炎癥介質(zhì)的釋放，對(duì)抗缺氧誘導(dǎo)的細(xì)胞損傷來(lái)發(fā)揮抗炎、保護(hù)臟器的作用。HMGB1作為一種有效的炎癥介質(zhì)，是肝纖維化發(fā)生發(fā)展的直接或間接的關(guān)鍵因素。在新近的一項(xiàng)

2、研究揭示了炎癥信號(hào)通路與肝纖維化通路有交叉對(duì)話(cross-talk)。肝臟的慢性炎癥是發(fā)生肝纖維化的主要原因之一。由此我們推測(cè)在CCL4誘導(dǎo)動(dòng)物模型中，芍藥苷是通過(guò)抑制HMGB1釋放來(lái)發(fā)揮抗炎和抗纖維化的作用。
　　 目的：
　　 研究芍藥苷抑制HMGB1釋放對(duì)肝組織炎癥和纖維化的保護(hù)作用。
　　 方法：
　　 第一部分實(shí)驗(yàn)：昆明雄性小鼠30只，采用CCL4灌胃法制備肝纖維化模型，隨機(jī)分為正常對(duì)照組（1

3、ul/g體重，生理鹽水/5d灌胃）、模型組（1ul/g體重，CCL4花生油溶液5d灌胃）、Pae組（造模同時(shí)，Pae100ng/g體重/5d灌胃），6周后小鼠纖維化模型建成。各組動(dòng)物處理前12小時(shí)禁食．摘除眼球法取血，ELISA法檢測(cè)血清中TGF-p、TNF-α的含量；分別對(duì)肝組織病理切片做HE染色和天狼猩紅染色觀察肝組織病理改變和膠原纖維形成情況；半定量RT-PCR法檢測(cè)小鼠肝組織中TGF-β、TNF-α水平。
　　 第二部分

4、實(shí)驗(yàn)：昆明雄性小鼠40只，采用CCL4灌胃法制備肝纖維化模型，隨機(jī)分為模型組（1ul/gCCL4油溶液/5d灌胃）、Pae組（造模同時(shí)，Pae100ng/g體重/5d灌胃）；Pae+HMGB1組（造模同時(shí)，Pae100ng/g體重/5d灌胃+HMGB110μg體重/5d/腹腔注射）、拮抗HMGBl組（造模同時(shí)，HMGB1Ab10μg/g體重/5d/腹腔注射）。各組動(dòng)物處理前12小時(shí)禁食，摘除眼球法取血，ELISA法檢測(cè)血清中TGF-β、

5、TNF-α的含量；分別對(duì)肝組織病理切片做HE染色和天狼猩紅染色觀察肝組織病理改變和膠原纖維形成情況；半定量RT-PCR法檢測(cè)小鼠肝組織中TGF-β、TNF-α表達(dá)水平。
　　 結(jié)果：
　　 1.6周后1ml/kgCCL4誘導(dǎo)肝纖維化動(dòng)物模型建立成功，病理組織學(xué)檢查發(fā)現(xiàn)，正常對(duì)照組小鼠肝組織的肝小葉結(jié)構(gòu)清晰，肝細(xì)胞索由中央靜脈向四周排列整齊；模型組早期肝纖維化形成；Pae組可明顯減輕小鼠肝組織的病理?yè)p傷；為進(jìn)一步研究抗纖維

6、化藥物的篩選和評(píng)價(jià)研究奠定基礎(chǔ)。
　　 2.Pae對(duì)CCL4誘導(dǎo)動(dòng)物模型有抗炎和抗纖維化的作用。ELISA結(jié)果顯示Pae組與模型組相比，動(dòng)物血清中TGF-β、TNF-的含量明顯減少(P＜0.05)。RT-PCR結(jié)果顯示Pae組TGF-β、TNF-β水平明顯減少(P＜0.05)。
　　 3.Pae+HMGB1組動(dòng)物的肝組織纖維沉積量和血清中TGF-β、TNF-α的含量與模型組無(wú)顯著差異(P＞0.05)。
　　 4.

7、Pae組和拮抗HMGB1組的動(dòng)物的肝組織纖維沉積量和血清中TGF-β、TNF-α的含量與模型組無(wú)顯著差異(P＞0.05)；但兩組均較模型組和Pae+HMGB1組明顯減少(P＜0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 Pae能明顯減少CCL4肝纖維化動(dòng)物模型相關(guān)炎癥因子和纖維化的表達(dá)水平；外源性注射HMGB1能抵消Pae的抗炎和抗纖維化作用，而且拮抗HMGB1同樣可以對(duì)模型鼠肝臟炎癥和纖維化起到保護(hù)作用；提示Pae是通過(guò)抑制HMG