芍藥苷抑制TLR4介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)保護(hù)小鼠肝缺血再灌注損傷.pdf

1、目的：探討芍藥苷（paeoniflorin，PF）對(duì)肝缺血再灌注（ischemia reperfusion，IR）損傷的保護(hù)作用并探討其作用機(jī)制。
　　方法：將C57BL/6小鼠隨機(jī)分為：假手術(shù)組（Control組）、芍藥苷對(duì)照組（PF組）、肝缺血再灌注損傷模型組（IR組）、芍藥苷干預(yù)組（PF+IR組），共四組。其中芍藥苷給予劑量為100mg/kg，分三次灌胃給藥。模型組和藥物干預(yù)組小鼠肝缺血1.5h再灌注6h，檢測(cè)血清中丙氨酸轉(zhuǎn)

2、氨酶（alanine aminotransferase，ALT）、天門(mén)冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶（aspartate aminotransferase，AST）的活性，酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）檢測(cè)血清中腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）和白細(xì)胞介素-1β（interleukin-1β，IL-1β）的水平。蘇木素-伊紅（hematox

3、ylin-eosin，HE）染色后鏡下觀察組織損傷的形態(tài)學(xué)變化，末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo) dUTP缺口末端標(biāo)記測(cè)定法（terminal deoxynucleotidyl transferase mediated dUTP nick-end labeling，TUNEL）法結(jié)合Caspase-3試劑盒檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況和Caspase-3活性水平。組織免疫化學(xué)（immunohistochemistry，IHC）法測(cè)定高遷移率族蛋白1（hig

4、h mobility group box-1 protein，HMGB1）的表達(dá)，定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（quantitative reverse transcription polymerase chain reaction，qRT-PCR）法檢測(cè)細(xì)胞膜上模式識(shí)別受體Toll樣受體4（toll like receptor4，TLR4）和炎癥因子TNF-α、IL-1βmRNA的水平。免疫熒光法（immunofluorescence，IF

5、）和流式細(xì)胞術(shù)（flow cytometry，F(xiàn)CM）檢測(cè)中性粒細(xì)胞的數(shù)量和表達(dá)變化。Western blot進(jìn)一步檢測(cè)TLR4及下游信號(hào)分子：磷酸化的c-Jun氨基末端激酶（p-c-Jun N-terminal kinase，p-JNK）、磷酸化的細(xì)胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶（phosphorylated extracellular signal-regulated kinase，p-ERK）、磷酸化的 p38（phosphorylated p

6、38，p-p38）以及磷酸化的轉(zhuǎn)錄因子NF-κB（phosphorylated NF-κB，p-NF-κB）蛋白表達(dá)的變化。
　　結(jié)果：與Control組相比，IR組血清中轉(zhuǎn)氨酶活性明顯升高，芍藥苷干預(yù)后血清中ALT、AST降低，HE染色和TUNEL結(jié)果顯示芍藥苷抑制了肝細(xì)胞凋亡，減輕了肝缺血再灌注誘導(dǎo)的損傷。芍藥苷可下調(diào)炎癥因子TNF-α、IL-1β的mRNA水平以及蛋白表達(dá)水平，而且抑制了中性粒細(xì)胞的活化和募集。芍藥苷下調(diào)HM