牙鲆感染淋巴囊腫病毒后靶器官定位及抗體水平檢測(cè).pdf

1、淋巴囊腫病(Lymphocystis disease LCD)是一種世界范圍流行的魚類病毒病，病原是淋巴囊腫病毒(Lymphocystis disease virus，LCDV)?；疾◆~的主要癥狀是體表長有皮膚瘤狀和菜花狀的贅生物，喪失商品價(jià)值。本論文用患淋巴囊腫病牙鲆體表腫瘤純化的淋巴囊腫病毒對(duì)健康牙鲆進(jìn)行人工感染，采用間接免疫熒光技術(shù)(IFAT)的方法對(duì)感染后牙鲆各組織進(jìn)行病毒檢測(cè)；應(yīng)用抗牙鲆免疫球蛋白單克隆抗體通過間接酶聯(lián)免疫法(

2、ELISA)檢測(cè)感染之后的牙鲆體內(nèi)總抗體水平和抗LCDV特異性抗體水平的變化規(guī)律，并對(duì)牙鲆接種LCDV滅活疫苗后特異性抗體的變化進(jìn)行了檢測(cè)。具體結(jié)果與方法如下： 采用體內(nèi)接種雜交瘤細(xì)胞，制備小鼠腹水的方法大量生產(chǎn)抗淋巴囊腫病毒單克隆抗體和抗牙鲆免疫球蛋白單克隆抗體，分別復(fù)蘇生產(chǎn)了4株(2A9、1A8、182和3G3)抗淋巴囊腫病毒單克隆抗體和10株(2D8、2H1、1E1、1C12、2E6、1E7、1B11、4D1、2A7和2E

3、8)抗牙鲆免疫球蛋白單克隆抗體，并對(duì)抗體進(jìn)行了純化。 參考以前的提純方法，并作了相應(yīng)的改進(jìn)，通過差速離心和密度梯度離心的方法直接從病魚體表瘤狀物分離提純淋巴囊腫病毒。用患淋巴囊腫病牙鲆體表腫瘤純化的淋巴囊腫病毒對(duì)健康牙鲆進(jìn)行人工感染，每7d采樣一次，采集牙鲆血清和鰓、前腎、中腎、脾、肝、腸、體腔膜、體表皮膚等組織，組織采用冰凍包埋劑包埋。 用冰凍切片機(jī)對(duì)上述組織進(jìn)行冰凍切片，通過間接免疫熒光技術(shù)(IFAT)對(duì)牙鲆鰓、前腎

4、、中腎、脾、肝、腸、體表皮膚各組織進(jìn)行檢測(cè)，以健康牙鲆的組織樣品為對(duì)照，結(jié)果發(fā)現(xiàn)在感染2周以后的腸、胃均檢測(cè)到病毒。 應(yīng)用抗牙鲆免疫球蛋白單克隆抗體通過間接酶聯(lián)免疫法(ELISA)檢測(cè)感染之后的牙鲆體內(nèi)總抗體水平和抗LCDV特異性抗體水平的變化規(guī)律。結(jié)果表明：感染1周后，牙鲆血清中特異性抗體和總抗體水平都顯著升高?？筁CDV特異性抗體水平在405nm處的OD值從對(duì)照的0.129上升至0.238；隨著感染時(shí)間延長抗體水平持續(xù)升高(