淋巴囊腫病毒的檢測及其對(duì)牙鲆鰓細(xì)胞系的感染研究.pdf

1、淋巴囊腫病是一種發(fā)生在全世界范圍的常見的魚類皮膚病,由淋巴囊腫病毒引起.患病魚體表長滿皮膚瘤狀和菜花狀的贅生物,面目可憎,喪失市場價(jià)值,造成極大的經(jīng)濟(jì)損失.分離培養(yǎng)淋巴囊腫病毒,篩選中和抗體,對(duì)研制淋巴囊腫病疫苗,預(yù)防該病的發(fā)生極為重要.由于淋巴囊腫病為慢性病,活體攻毒實(shí)驗(yàn)耗時(shí)長且不易成功,因此,病毒在細(xì)胞中的培養(yǎng)是該項(xiàng)研究的基礎(chǔ)和關(guān)鍵所在.該文運(yùn)用多種方法,證實(shí)牙鲆鰓細(xì)胞系為淋巴囊腫病毒的敏感細(xì)胞系,并對(duì)淋巴囊腫病毒感染鰓細(xì)胞的最適條

2、件和時(shí)間動(dòng)力學(xué)等因素作了較為系統(tǒng)的觀察.該文通過改變培養(yǎng)牙鲆鰓細(xì)胞的氣體、血清濃度、接種密度等條件,系統(tǒng)研究了鰓細(xì)胞在20℃(淋巴囊腫病發(fā)病溫度)的最適生長條件.實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,牙鲆鰓細(xì)胞的最適接種密度為3-4×10<'5>cells/ml,開放式培養(yǎng)時(shí)最適CO<,2>濃度為2﹪,含2﹪血清的培養(yǎng)液能較好的維持細(xì)胞生存而不大量增殖,含10﹪血清的培養(yǎng)液能使細(xì)胞正常生長增殖,含20﹪血清的培養(yǎng)液能使細(xì)胞迅速增多,并能使細(xì)胞密度維持很高的水平

3、.該文采用不連續(xù)密度梯度離心的方法分離提純淋巴囊腫病毒作為抗原,運(yùn)用單克隆抗體技術(shù),重申選、克隆出2株產(chǎn)生抗牙鲆淋巴囊腫病毒單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞(1A6、1H9).經(jīng)免疫熒光抗體法檢測,2株單抗與淋巴囊腫細(xì)胞包涵體呈陽性反應(yīng),可作為檢測病毒的有利工具.以病毒粗提液感染鰓細(xì)胞,1-2天出現(xiàn)明顯細(xì)胞病變,TCID<,50>為40μl 2<'2.57>稀釋的病毒液.以出現(xiàn)細(xì)胞病變培養(yǎng)孔的上清液接種正常鰓細(xì)胞,細(xì)胞不出現(xiàn)病變;以出現(xiàn)細(xì)胞病變培